产品名称：人B细胞生长因子（BCGF）ELISA试剂盒

规格：48T/96T

一、样品收集、处理及保存方法

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

二、需自备试剂和器材

1． 标准规格酶标仪。

2． 自动洗板机。

3.  37℃恒温箱。

4． 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器。

5． 使用中性 PBS 或 TBS 作为洗涤液。

6  蒸馏水。

7. 吸水纸。

三、实验注意事项

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔加待测样本50μL。

3.  样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品名称：人B细胞生长因子（BCGF）ELISA试剂盒

我能否使用自己的稀释液或者缓冲液？

◆ 每个试剂盒中都含有按配方配制的与特异性样品种属相配套的稀释液，以确保待检测的样品被正确稀释。具体请参看说明书。

我检测到的样品值在测定实验的动态范围之外，我是否可以用这些数值？

◆ 只有随标准曲线降低的样品值才被推荐使用。在标准曲线范围外的值都是非线性的，会导致错误的外推值。

◆ 如果测定的样品值比最高的标准品的值还要高，则此样品需要进一步的稀释并重新进行检测。

◆ 如果测定的样品值远低于测定范围，则样品被认为是无法被检测。

我的标准曲线看上去还不错，但是却没有达到我预期的结果，为什么？

◆ 样品可能不含有待分析物。

◆ 稀释液的影响可能遮蔽了检测。确保采用说明书推荐的稀释度。

◆ 如果确实采用的是推荐的稀释度，则检查稀释操作是否正确。过度稀释将导致样品值低于标准曲线范围。

洗涤方式怎样影响我的标准曲线？

◆ 不*的洗涤会降低测定精确性，导致不理想的标准曲线结果。确保洗板机的正常工作，确保酶标板各孔被充分洗涤却不干燥。

移液方式怎样影响我的标准曲线？

◆ 不合理的移液操作会导致高CV值和不理想曲线。

◆ 在制作标准曲线的过程中，不正确的移液方式会导致错误的稀释，从而使错误的数值进入标准曲线中，或者产生非线性曲线。确保移液器正常工作。每孔中的液体体积不等可能就是移液器失灵或者枪头使用不当所致。