碱性磷酸酶染色实验服务

碱性磷酸酶染色实验技术简介:

碱性磷酸酶(AKP) 的显示方法zui早由Gomeri (1939) 提出，现在这种方法称为Gomeri法。碱性磷酸酶是指磷酸单酯酶I,它能在pH8. 6~10.0的zui适条件下分解磷酸单酯，对于与磷酸相接的醇基没有特异性，Gomeri法是让该酶在碱性条件下，分解甘油磷酸钠，产生磷酸根。

碱性磷酸酶染色实验技术原理:

在一定条件下，使细胞中的酶作用于酶的底物，使其产物在原地进行捕捉、沉淀转化为有色产物。细胞组织中的碱性磷酸酶在碱性(PH9.0- 9.6)环境下使作用液中的底物(a- 磷酸萘酚钠)水解，产生出a蔡酚，然后再与偶氮盐偶联，生成不溶性的耐晒染料(zui终产物的颜色因所用偶氮盐的品种不同而有所不同)。

实验操作流程:

1、取材、固定、包埋、切片;

2.取已粘好烘干的切片两块，放入二甲苯(一)→二甲苯(二) (各3-4分钟) 的染缸中进行脱蜡，再经100%乙醇(一)- +100%乙醇(二) - -95%乙醇- -90%乙醇- -70%乙醇- -30%乙醇- +z水。 每级各一分钟，在移切片时，用镊子夹住切片震荡并提起，放下反复几次，在移入下-染缸边緣前稍停留。让溶液滴净后,再入下一染缸，以免把上一染缸溶液过多带入下-染缸，而影响切片质量;

3.将其中一块切片以蜡笔作-标记(用作对照组切片)，放入沸水中煮沸5分钟;

4.将两块切片均放入AKP作用液中孵育30-60分钟，作用液要事先预热到37"C,水浴中进行:

5、取出切片在蒸馏水中洗涤;

6、放入硝酸钴溶液2-3分钟;

7.蒸馏水冲洗干净，否则切片易被污染，影响定位;

8、切片浸入硫化铵中2-3分钟;

9.蒸馏水冲洗干净;

10.经各级酒精脱水。即30%乙醇- -70%乙醇- -90%乙醇- -950%乙醇- -100%乙醇 (二)- -100%乙醇 (一)，各级一分钟在显微镜下观察，细胞中有黑色沉淀存在的地方，就表明有酶的存在。煮沸的对照切片无黑色沉淀。