服务简介

几乎所有的蛋白质合成都起始于N-端，蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。例如N-端序列影响蛋白质的半衰期，同时关联着蛋白亚细胞器定位等，对蛋白进行N-端测序分析，有利于帮助分析蛋白质的高级结构，揭示蛋白质的生物学功能。

对蛋白N端测序主要分类两大类，其一为非质谱技术，其二为质谱技术。各自都有其使用的长处和制约之处。蛋白质和多肽N-端测序技术是以Edman化学降解法为基础的。Edman化学降解是测定蛋白质一级结构的方法主要是从蛋白质或多肽氨基酸末端进行分析，其基本原理是包括通过异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的N-端残基的偶联，苯氨基硫甲酰酞（PTC-肽）环化裂解，和噻唑呤酮苯氨（ATZ）转化为苯异硫尿氨基酸（PTH-氨基酸）三个主要的化学步骤，每个循环从蛋白质与多肽裂解一个氨基酸残基，同时暴露出新的游离的氨基酸进行下一个Edman降解，而后通过转移的PTH-氨基酸鉴定实现蛋白质序列的测定。

百欧泰拥有多年的蛋白组学研究经验，同时拥有经验丰富的技术人员，优质的测序仪器，应用现有的质谱技术平台，可以提供高质量的蛋白质N端测序服务。采用完善Edman测序系统，为广大科研工作者和科研客户提供纯化后蛋白产物、蛋白品、抗体以及蛋白疫苗的N端测序服务。我们的不断自我完善测序系统体系，通过Edman降解法可以确保精准测定N端多个氨基酸的序列信息。

关键词：N-端测序，Edman降解法，结构分析

 服务步骤

1 样品处理

蛋白样品SDS-PAGE分离

PVDF膜转移

2 上样偶联

 将异硫氰酸苯酯和蛋白质或多肽N端氨基酸耦合，形成衍生物

3 样品切割

将多肽或蛋白的N一端肽键选择性的切断

4 萃取

萃取出释放的氨基酸衍生物

5 转化

强酸性条件下转化为稳定的乙内酰苯硫脲氨基酸

6 鉴定

以色谱法鉴定出降解下来的PTH-氨基酸种类，得到蛋白质或多肽N端序列信息

该方法特点为：从N-段依次对氨基酸进行鉴定

7 交付（可商榷）

测序报告

质谱参数

原始数据

服务应用

1  蛋白表达产物的验证

2  细胞株建立和发酵过程中蛋白产物的验证

3  蛋白降解/酶切分析

4  对于蛋白数据库中不存在的全新蛋白序列进行分析

蛋白样品需知

1 样品纯度不能太低，经验认为纯度大于90%的蛋白才适用于测序反应

2  N端封闭或糖基化的蛋白质难以进行Edman反应，无法测序

3  转膜时应用PVCF膜，不能使用NC膜

4  蛋白冻干粉纯度大于95%可不转膜，但缓冲液不能含盐

服务优势

Edman化学降解法是常用且经济实惠的蛋白N端测序方法。综合有以下特点：

异硫氰酸苯酯与所有氨基酸残基的反应产率和回收率都相当高，反应副产物少

色谱法鉴定结果较为精准

周期短

百欧泰团队具有丰富的蛋白组学经验，可提供多种服务优势：

采用成熟的质谱分析技术，鉴定结果准确可靠；

服务为主：价格合理，可根据客户需求综合分析，为客户提供满意的结果；

专业的技术支持，保障强力、周到及时的售前售后服务支持，随时为您解答出现的任何问题。

服务流程

双方沟通一致后确定实验方案，确定服务要求-签订合同—预付款-开始实验-成果交付

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