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P3406 His蛋白纯化试剂盒
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上海维景生物是一家面向全国以专业从事免疫学实验试剂和抗体试剂代理销售为主的公司，服务对象主要为大学研究所科研人员、大型制药公司等。
同时公司还是美国Engibody品牌的全国总代理，Engibody公司产品专注于标签抗体、内参抗体及标签抗体偶联beads这一领域。其开发的标签抗体偶联agarose beads（affinity gel）在科研以及临床研究中享有很高的声誉，更借助Engibody在标签抗体、内参抗体领域的优势，成为WB,IP,Co-IP全套试剂及试剂盒的专业供应商。
维景生物是一家专注标签抗体偶联beads（affinity gel），标签抗体，HRP直标标签抗体，内参抗体等抗体销售,及WB,IP,Co-IP全套试剂及试剂盒的高科技生物公司。
详细信息
产品名称：His tagged Protein Purification Kit
品牌：Engibody
货号：P3406
简介：his蛋白纯化试剂盒，用于his标签融合蛋白的纯化富集。
Description
His-Tagged Protein Purification Kit (Ni-NTA Agarose Resin 6FF, Soluble Protein)
Components
one column; 4ml Ni2+ Sepharose 4B; 5g NiSO4; 6g imidazole; 10g EDTA
Storage instruction
Store at +4°C and do not freeze.
Protocols
Procedure
1).Resuspend the Ni2+ Sepharose 4B by tapping and inverting the vial several times immediately before dispensing. Do not vortex. Then transfer 2ml into the column, the gel will sedimentate naturally.
2).Wash the column with 5 bed volumes of water, then equilibrate the column with 5 bed volumes of binding buffer（20mmol/L phosphate buffer, 500mmol/L NaCl, pH 7.8）.
3).Centrifuge cell lysate（20mmol/L phosphate buffer, 500mmol/L NaCl, pH 7.8）at 12,000 g, collect the supernatant and load it into the column at a rate of 0.1ml per min.
4).Wash the column with 5-10 bed volumes of Binding buffer at a rate of 0.1ml per min.
5).Elute Separately with Elution buffer of imidazole solutions at diferrent concentration(usually 10, 20, 50, 100, 150, 200mmol/L, depending on his tagged fusion protein) . Then collect every eluate.
6).SDS-PAGE gel electrophoresis can analyze the purity of his tagged fusion protein).
Regeneration
1).Wash the column with 2 bed volumes of 0.2mol/L Acetic acid, then Wash the column with 5 bed volumes of water.
2).Wash the column with 5 bed volumes of 50％ ethanol, then Wash the column with 5 bed volumes of water.
3).Wash the column with 5 bed volumes of 0.1mol/L EDTA, then Wash the column with 5 bed volumes of water.
4).Wash the column with 2 bed volumes of 0.1mol/L NiSO4, then Wash the column with 5 bed volumes of water.
试剂盒描述
his标签融合蛋白纯化试剂盒（Ni-NTA琼脂糖树脂6FF，可溶性蛋白）
kit内组份
一个clolumn（12ml规格重力流空柱子）；4ml Ni-NTA琼脂糖6FF；5克硫酸镍；6克咪唑；10克EDTA，缓冲液
存储说明
储存于+4°C，不要冻结。
Protocol
步骤
1).在配药前，轻敲并翻转小瓶几次，重新注入Ni2+Sepharose 4B。不要涡流。然后将2ml转移到柱中，凝胶将自然沉淀。
2).用5床体积的水洗涤柱，然后用5床容量的结合缓冲液（20mmol/L磷酸盐缓冲液，500mmol/L NaCl，pH 7.8）平衡柱。
3).离心12000 g的细胞裂解液（20mmol/L磷酸盐缓冲液，500mmol/L NaCl，pH 7.8），收集上清液并以0.1ml/min的速度将其装入柱中。
4).用5-10床体积的结合缓冲液以0.1ml/min的速率洗涤柱。
5).分别用不同浓度（通常为10、20、50、100、150、200mmol/L，取决于其标记的融合蛋白）的咪唑溶液洗脱缓冲液洗脱。然后收集每一次洗脱液。
6).SDS-PAGE凝胶电泳可以分析his标记的融合蛋白的纯度）。
再生
1).用2床体积的0.2mol/L乙酸洗涤柱，然后用5床体积的水洗涤柱。
2).用5床体积的50%乙醇洗涤柱，然后用5床容量的水洗涤柱。
3).用5床体积的0.1mol/L EDTA洗涤柱，然后用5床容量的水洗涤柱。
4).用2床体积的0.1mol/L NiSO4洗涤柱，然后用5床体积的水洗涤柱。
仅用于科研，不作用人体
