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对膜蛋白提取有高特异性和高产量

每个批次的PureCube凝胶均是按照严格的质量标准体系生产并严格检验，以确保每一批分装的产品都有高的蛋白结合能力。通过与特异性抗原表位相互作用，辅以优化过的纯化操作步骤，能使目标蛋白在洗脱组分中有高产出量。图1是对CXC趋化因子受体4(CXCR4)的纯化溶于Fos-Choline®-14的带标签蛋白通过大肠杆菌表达，再经由含PureCube Rho1D4琼脂糖的层析柱纯化。用Rho1D4多肽作为洗脱液，4次洗脱组分每毫升共收集到0.8mg、1.0mg、0.85mg和0.6mg目标蛋白。蛋白印迹结果说明CXCR4大约是65 kDa和35 kDa。这些条带是39.7 kDa膜蛋白的二聚体和单体。单体、二聚体的分离以及去除洗脱肽段，可以通过排阻层析的方法实现。

图1：用PureCube Rho1D4琼脂糖纯化CXCR4。

大肠杆菌裂解液（TL）溶解在Fos-Choline®-14中，溶解的组分（SF）与装有Rho1D4抗体的免疫亲和层析柱相结合。平衡组分中没有测得损失目标蛋白，经分光光度计测定，CXCR4在洗脱组分（E1-E4）中得浓度范围在0.6-1.0mg/mL。

表1：有文献报道的使用Rho1D4系统纯化膜蛋白的纯度和产率。尽管很多用Rho1D4系统纯化的膜蛋白均为G蛋白偶联受体家族，该系统也可以有助于辨别其他如转运体之类的膜蛋白。 IAC：免疫亲和层析；SEC：排阻层析。

在20世纪80年代发现Rho1D4表位和配对抗体，当时通过将抗体偶联到Sepharose®上来纯化在猴肾细胞中表达的牛视紫红质。自此，Rho1D4系统（标签，偶联抗体的亲和基质，洗脱肽）开始用于少量膜蛋白的纯化，包括G蛋白偶联受体（GPCR），ATP结合转运体，溶质反向转运体和一个四次跨膜蛋白。

图2：假设有3个跨膜域的膜蛋白。Rho1D4标签加到膜蛋白C端，它的序列是T-E-T-S-Q-V-A-P-A

通过转基因修饰在目标膜蛋白的C端（或N端）加上Rho1D4标签（如图1）。一旦配有该序列，即可用装载有Rho1D4抗体的亲和基质捕获目标蛋白，并随后通过添加过量Rho1D4多肽，产生竞争性结合基质表面抗体来洗脱目标蛋白，用此方法洗脱比改变pH值等方式更加温和。

Rho1D4系统的一大优势是抗体与表位相互作用特异性非常高。而其另一大优势是洗脱目的蛋白收率相当高。利用Rho1D4纯化的目标蛋白可用于功能性研究，如：配体结合的特性，蛋白与蛋白间的相互作用。

*纯度是从低浓度经一步Rho1D4 IAC在反应溶液中得出的；产率是在洗脱成分浓缩并过SEC柱后计算。

产品优势：

（1）德国制造，欧美膜蛋白纯化产品供应商；

（2）膜蛋白纯化的理想解决方案，可以获得纯净且活性的膜蛋白；

（3）结合能力可高达3-4mg/mL；

（4）高度特异性纯化带有标签的重组膜蛋白；

（5）可重复再生使用；

（6）好的流量分布和小空隙体积；

（7）兼容常用的色谱仪器；

（8）配合Nanodisc使用，是目前非常有效的膜蛋白提取解决方案，数家科研院校正在使用

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