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小鼠角膜基质细胞永生化

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供货周期:现货 规格:1×106 货号:A01X1247 主要用途:仅供科研实验 组织来源:实验动物的正常眼组织 种属来源:小鼠
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上海抚生实业有限公司(Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd.,China)是一家生物企业,主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的销售。主营产品:生化试剂、试剂盒、ELISA试剂盒、抗体、重组蛋白、生化检测试剂盒、分光光度法检测试剂盒、荧光定量PCR检测试剂盒、细胞株、原代细胞、细胞培养基、标准溶液产品。代理并销售进口SIGMA试剂、abcam抗体、R&D抗体、CST抗体、ATCC细胞、BD公司、GE公司、赛默飞世尔公司产品。


上海抚生实业有限公司(Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd.,China)先后与天津中医学院、复旦大学、上海交通大学医学院、上海交通大学、华东师范大学、第二军医大学、南京大学,暨南大学,南京工业大学,曙光医院、华山医院、瑞金医院、上海有机研究所、中科院上海分院等多家单位建立了良好的合作关系。本公司可为您提供科研ELISA试剂盒,种属标本齐全,有专门针对人血清、血浆、全血、分泌物、尿液、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液等标本的试剂盒;另有针对各种动物(鼠、兔、牛、马、鸡、猪、狗、山羊、猴、鱼)的科研试剂。

公司秉承“专注品质、信守承诺、积极沟通、创新服务”的企业文化积极参与生物领域的技术创新和技术服务,力求为我国科研事业更好的,更专业的服务!

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详细信息

小鼠角膜基质细胞永生化

一、细胞基本属性

细胞名称

小鼠角膜基质细胞永生化

产品规格

1×106

商品货号

A01X1247

细胞详述

角膜位于眼球前壁的一层透明膜,约占纤维膜的前1/6,从后面看角膜呈正圆形,从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不同,中央部最薄。角膜分为五层,由前向后依次为:上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。

角膜基质为中层结缔组织,透明,角膜基质层中的主要细胞成分是角膜基质细胞,它能合成和分泌纤维,并且对胶原束的排列和平衡都起作用。

该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。

注意事项:  收到细胞后第一次传代建议1:2传代,充液培养基是维持培养基,不能用来培养细胞。

细胞特性

1) 组织来源于实验动物的正常眼组织。

2) 细胞鉴定:波形蛋白(Vimentin)免疫荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5) 细胞生长方式:长梭形细胞,不规则细胞,贴壁培养。
原代细胞分离培养的思路:

取材--分离--培养--鉴定

首先将组织从机体中取出,经胰dan白酶/胶原酶处理后分散成单细胞,再在合适的培养基中培养,使细胞繁殖到一定系数后进行细胞鉴定。

6.jpg

实验步骤:

一、取7-10d雄性SD大鼠,颈椎脱臼处死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。

二、在超净工作台中,将大鼠断头置于玻璃培养皿中,打开颅腔后取出全脑,放在盛有预冷的PBS玻璃培养皿中,去除小脑和间脑。

三、将大脑半球在干滤纸上缓慢滚动以去除软脑膜和脑膜大血管,再放在新的盛有预冷的PBS玻璃培养皿中。

四、用细解剖镊去除大脑白质、残余大血管和软脑膜,保留大脑皮质。

五、大脑皮质放于DMEM中,剪碎成约1mm3大小,放入50ml的离心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型胶原酶,0 .025-0 .05%IV型胶原酶,200-400U DNaseI),混匀后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室温1 000×g离心8min,去上清液。

七、沉淀中加入20%BSA重悬浮,充分混匀,1 000×g,20min,4℃离心,去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的胶原酶/分散酶,0.05-0.1%I型胶原酶,100-300U DNaseI )重悬浮,混匀,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室温离心6min,去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培养液悬浮混匀,铺于经离心形成连续梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃离心10min。

十、靠近底部的红细胞层之上的白黄色的层面即为纯化的微血管段,吸出后DMEM漂洗两次(离心1000×rpm,6min,室温),去上清液。

加入DMEM培养液(20%FBS,4ug/ml素 )重悬浮,接种于含5%的大鼠 血清37℃孵育过夜所制备的细胞培养皿中,置于37℃、5%CO2培养箱内静置培养24h后更换不含素的混合培养基,随后隔天换液。

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注意事项:

1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。

3. 传代培养过程中,yi酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
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产品参数

供货周期 现货
规格 1×106
货号 A01X1247
主要用途 仅供科研实验
组织来源 实验动物的正常眼组织
种属来源 小鼠

规格类型

1×106 3500元 15瓶可售
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