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抗体酵母展示技术服务
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泰克生物科技（天津）有限公司致力于为客户提供基于噬菌体展示和纳米抗体研发平台的定制服务，泰克生物的研发团队在抗体发现、重组抗体开发和噬菌体文库构建和筛选方面拥有丰富的经验。我们的服务包括使用各种抗体库技术（包括噬菌体展示、细菌展示和酵母展示）生产人、猴、兔、牛、羊、羊驼和骆驼单克隆抗体。此外，泰克生物拥有的抗体发现和噬菌体平台可以提供：抗体偶联药物发现服务、CAR候选分子发现服务以及相关的抗体测序和亲和力测定服务；纳米抗体文库构建与筛选服务，噬菌体文库构建和筛选服务以及抗体亲和力成熟等相关服务。
泰克生物的科学家致力于为战胜癌症以及各种疾病提供生物学研究方法和服务。泰克生物的科学家认为，建立以客户服务为中心的运营模式对于优化药物开发流程，同时组建不同研究领域背景的团队进行未来的药物发现和癌症研究具有重要意义。泰克生物的这一长期发展目标激励着我们为客户提供优质的技术服务和研究成果。
详细信息
泰克生物着力于为客户提供高质量，且具性价比的抗体药物前期发现技术服务。我们在药物抗体发现方面拥有10年的项目开发经验和心得，积累了充足的抗体定制和重组蛋白生产经验。基于酵母体展示技术（Yeast Display Technology）平台的服务，泰克生物能够为客户提供一系列包括但不限于兔源、鼠源、羊源、驼源等不同物种的单克隆抗体制备服务，及其配套的完整可追溯性文件体系。
酵母抗体展示技术（Yeast Display Technology）是指用抗体序列可变区与凝集素Aga2p融合表达，Aga2p蛋白亚基通过两个二硫键与固定在酵母细胞壁上的Aga1p 蛋白亚基结合，结合流式分选技术，将靶向抗原的特异性抗体给筛选出来。
█ 酵母展示抗体文库构建服务
泰克生物可为客户提供来自驼源VHH纳米抗体库，以及其他物种scFv形式抗体的酵母展示文库构建及筛选服务。VHH纳米抗体库，又称为驼源重链抗体文库，抗体分子量大小为15kDa，是驼源动物产生的一种抗体。酵母抗体文库展示体系受限于自身物理特性限制，物理库容滴度一般<107，因此主要应用于客户对项目库容要求不高，动物免疫后PBMC细胞经过二次分选以及避免漏掉二硫键形成的抗体发现项目。同时酵母展示文库相对噬菌体展示文库技术而言，前者在微量抗体表达后抗体活性层面相较于后者要高，得益此基础，在流式筛选时就能区分抗体的亲和力高低。
目前被广泛应用于CAR-T/CAR-NK治疗性抗体，主要以驼源VHH抗体（又被称为纳米抗体）发现为主，VHH/scFv抗体酵母展示发现路径如图1所示：
图1基于酵母技术平台的VHH/scFv抗体发现服务
█ 抗体酵母展示技术服务内容和周期
步骤 | 服务内容 | QC标准 | 周期 |
Step1:蛋白表达 | (1) 密码子优化+基因模板合成+表达载体构建； (2) 质粒抽提+转染（哺乳表达系统）目的蛋白检测（WB，SDS-PAGE）； (3) 蛋白表达放大+蛋白亲和纯化； | 交付：表达载体，克隆甘油菌，重组蛋白3-3.5mg，纯度>85%，标准实验报告
| 4-6周 |
Step2:动物免疫 | (1) 动物免疫4次，加强免疫一针，共计免疫5针； (2) 免疫前采集阴性血清，第4针采血进行ELISA检测血清效价； (3) 若第4针血清抗体效价（蛋白抗原>105；多肽抗原>104）满足要求，则采血前7天再次加强免疫1针，如不满足要求，则继续常规免疫； (4) 效价合格，采血分离单核细胞； | 动物：背景清晰（年龄，性别，防疫情况）； 免疫：蛋白抗原>105；多肽抗原>104； 采血：数量100ml以上； PBMC细胞：>105/vial
| 8-10周 |
Step3:模板cDNA制备 | (1) PBMC总RNA提取（RNA提取试剂盒） (2) 高保真RT-PCR制备cDNA（反转录试剂盒） | cDNA：反转后>1ug/ul，胶图分布均匀； cDNA模板总量>150ug； | 1 天 |
Step4:抗体酵母展示文库构建 | (1) 以cDNA为模板，两轮PCR扩增VHH基因 酵母表达质粒构建与转化： VHH基因拼接酵母展示载体，电击转化酵母宿主菌，构建抗体库，电击次数不低于10次 鉴定：随机挑选24个克隆，PCR鉴定阳性率+PCR鉴定多样性+插入率 | 文库阳性率：>90%； 文库插入性率：>90%； 库容：>106 | 1-2周 |
Step5:文库筛选（磁珠+Facs） | (1) 磁珠分选； (2) FACS分选（免疫双标分选）； (3) 铺板+阳性克隆菌培养+抗体基因测序；（>20个，多达96个）； | 阳性标准：双阳性菌株； VHH筛选标准：CDR氨基酸序列不同 | 2-3周 |
Step6:抗体验证（体外验证） | (1) 将获得的抗体序列构建合适的表达载体进行表达+亲和纯化+抗体蛋白定量； (2) Elisa验证抗体与抗原结合，进行下游验证（交付EC50数据）; (3) BLI法验证抗体亲和力； (4) 细胞功能验证：流式验证； (5) 验证细胞系（抗原受体过表达细胞系）； | 交付：表达载体，克隆菌株，表达菌株，重组抗体蛋白1mg，纯度90%； 快速亲和力测定结果； | 4-6周 |
█ 抗体酵母展示技术平台抗体酵母展示技术平台抗体酵母展示技术服务优势
✔物种适应性广泛：人，鼠，兔，羊，羊驼，骆驼，鱼等物种的单抗开发均兼容
✔技术平台成熟：提供的1级免疫文库的建库库容为106-107；插入率均满足>95%，筛选获得的抗体亲和力普遍处于nM- pM级别
✔开发周期短：获得PBMC后，建库到筛选获得抗体序列，3-4周
✔产品交付标准高：针对免疫库，交付免疫前后血清，抗体展示文库，酵母表达菌株，抗体序列
✔实验记录可追溯：QC质控标准（含RNA提取，cDNA制备等），中英文实验报告，手写实验记录本
