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96-001-01 ESF 921™昆虫细胞培养基
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- 96-001-01
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详细信息
产品描述
ESF 921™昆虫细胞培养基是一种完整的无血清、无蛋白的培养基，用于稳定的细胞生长、蛋白表达和杆状病毒载体的生产，用于昆 虫细胞，包括Sf9、Sf21、Tni和果蝇S2。仅供研究使用，不适用于诊断程序。
产品信息
ESF921是一个1倍完整的不用稀释、即用的培养基。无需添加谷AN酰胺或表面活性剂，如泊洛沙姆188；不推荐使用KANG生素，然而， 必要时，可以使用QING霉素-LIAN霉素（双抗）或庆DA霉素（三抗）。
安全信息
请阅读安全数据表（SDS），并遵循操作说明；佩戴适当的防护眼镜、衣服和手套。
培养
培养基： ESF 921
细胞系(s)：Sf9、Sf21、Tni、S2
培养类型：悬浮培养和贴壁培养
推荐培养容器：摇瓶或转瓶
温度范围：27°C至28°C
培养箱：干燥，无二氧化碳环境。确保适当的气体交换，尽量减少培养物暴露在光线下。
细胞对于ESF 921培养基的使用驯化
细胞适应ESF 921培养基时，建议使用梯度适应。在开始适应过程之前，细胞存活率至少要达到95% (Sf9)、93% (Tni)、90% (Sf21)或85% (S2)，并且生长速度处于细胞分裂对数生长期。
1.将细胞传代至esf921与原始培养基的比例为50:50。在适应过程中，按照1 × 个细胞/ mL的原始播种密度接种。
2.在干燥、无二氧化碳培养箱中以27°C培养，在轨道摇床平台上以120-140 rpm旋转摇瓶培养物。松开盖子，允许气体交换。
3.当活细胞数量为4-6 × 个/ mL时传代(分裂后3-4天)，按照75:25的比例放入ESF 921原始培养基中。
4.重复上一步，增加ESF 921与原始培养基的比例（75：25，然后是88：12,95：5），直到使用100% ESF 921。可能需要在一 种比例的情况下传代多次。
5.昆虫细胞在适应过程中可能会膨胀。膨胀2-3微米是正常现象，5微米以上是细胞应激培养的提醒，应该用一批新的细胞重新开始 适应。 在100% ESF 921中传代几次后，活细胞计数应符合上表，存活率>90%。
低温冷藏
1.冻存培养基为无菌过滤的90% ESF 921+10%DMSO。可添加0.15 M的海藻糖，在4°C进行存储和使用。
2.准备所需数量的细胞，在对数生长期，活力>90%。
3.确定活细胞的密度，并计算所需的冷冻介质的体积，保证最终的细胞密度在25-50x106细胞/mL。
4.1000 rpm离心5分钟，收获细胞，将细胞重悬于预定体积的4°C冷冻培养基中。
5.按照1mL等分悬浮液放入冷冻瓶中。
6.按照标准程序(每分钟降低1°C)在自动或手动控制速率的冷冻设备中实现低温保存。
7.将冷冻细胞转移到液氮中，建议在-200°C至-125°C的气相储存。
