高浓度基质胶-含酚红

货号：MG2248、MG4248、MG6248

存储条件：-80℃ 保存，避免反复冻融。

产品简介：

基质胶是从Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤提取的可溶性细胞培养基质，含有丰富的细胞外基质蛋白，主要包括层粘连蛋白、胶原IV、肝素硫酸酯蛋白聚糖、巢蛋白以及大量的生长因子。

基底胶在室温条件下，聚合形成具有生物学活性的三维基质，模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能，有利于体外细胞的培养和分化，以及对细胞形态、生化功能、迁移、侵染和基因表达的研究。基质胶也适用于类器官生长、分化、代谢和毒理学研究。高浓度的基质胶可以用于动物体内成瘤实验的细胞包被。

操作方法：

一、薄胶成胶方法：

1. 冻融后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状。

2. 将需要使用的培养板置于冰上，加入浓度为50μL/cm2 生长面积的基质胶。

3. 在 37℃放置 30 分钟，即可使用。

二、厚胶成胶方法：

1. 冻融后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状。

2. 将需要使用的培养板置于冰浴，将培养的细胞与基质胶混合，用移液枪头使其悬浮于基质中。加入浓度为 150-200μL/cm

2 生长面积的基质胶。

3. 在 37℃放置 30 分钟，可成胶。可以加入细胞培养的基质，也可使细胞直接生长在胶表面。

三、薄层包被方法：

1. 冻融后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状。

2. 根据使用需要，采用无血清培养基稀释基质胶。根据实验需要确定最佳包被浓度。

3. 将稀释的 基质胶包被于所需的培养器皿中，包被量至少覆盖整个器皿的生长表面。室温下孵育 1 小时。

4. 去除未结合的基质胶，用无血清培养基轻轻地冲洗。

四、裸鼠成瘤实验

1.取处于对数生长期肿瘤细胞，即细胞融合度达到80%~90%。

2.弃去瓶内培养液，用PBS清洗2遍，加入0.25%含EDTA的yimei0.8~1.0 ml中，将培养瓶平放静置1 min，倒置显微镜下观察细胞状态，在细胞逐渐变圆或有细胞脱落时加入5 mlwanquan培养液终止消化。

3.吹打管轻柔吹打细胞悬液，进行细胞计数。

4.取一定数量（每只小鼠不低于1X10^5细胞量，最高不超过1X10^7细胞/0.1ml终浓度）细胞放入15 ml离心管中，200×g离心3 min，弃上清液，用已预冷的移液器及吸头将基质胶和含10%FBS的肿瘤细胞wanquan培养液的1∶1混悬液加入离心管，轻柔吹打，避免产生气泡，均匀重悬细胞，冰上放置。

5.麻醉5-6w龄的裸鼠，提前预冷微量进样器和针头，用不带针头的 1mL 注射器将细胞和胶的混合物吸入针头，再装上16G-29G针头在每只裸鼠右侧背部皮下接种，左右轻柔晃动，预留细胞悬液空间，注射量为400 μl/只。

6.动物经过上述处理后，每周定期观察裸鼠生长状况，用游标卡尺对瘤体的长度（L）、宽度（W）进行测量。体积大小按公式：V=1/2LW2进行计算。

注意事项：

1.收到产品并确认到货情况无异常后，请将 基质胶储存于--80℃冰箱，短暂使用可置于--20℃冰箱。切勿将基质胶储存于自动除霜的冰箱中。在第一次融化后请分装保存，应避免基质胶反复冻融。

2.因基质胶在 10℃以上即可成胶，在操作过程中，保持基质胶一直置于冰上，所有接触的细胞培养器皿，移液吸头，分装管等都必须预冷后使用。

3.所有操作均需在无菌环境下进行，试剂瓶瓶盖可用 70％乙醇擦拭，并自然干燥。应使用预冷的移液器以保证基质胶呈匀浆状。

溶解时可将基质胶基质置于 4℃冰箱内冰上过夜溶解。成胶后基质胶可以在 4℃ 24－48 小时后重新呈液态。