MG2277-1ml 基质胶-hESC验证含酚红
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详细信息
hES/iPS验证基质胶
货号：MG2277、MG4277
存储条件：-80℃ 保存，避免反复冻融。
产品简介：
基质胶是从Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤提取的可溶性细胞培养基质，含有丰富的细胞外基质蛋白，主要包括层粘连蛋白、胶原IV、肝素硫酸酯蛋白聚糖、巢蛋白以及大量的生长因子。
基底胶在室温条件下，聚合形成具有生物学活性的三维基质，模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能，有利于体外细胞的培养和分化，以及对细胞形态、生化功能、迁移、侵染和基因表达的研究。基质胶也适用于类器官生长、分化、代谢和毒理学研究。高浓度的基质胶可以用于动物体内成瘤实验的细胞包被。
操作方法：
一、薄胶成胶方法：
1. 冻融后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状。
2. 将需要使用的培养板置于冰上，加入浓度为 50μL/cm2。
2 生长面积的基质胶。
3. 在 37℃放置 30 分钟，即可使用。
二、厚胶成胶方法：
1. 冻融后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状。
2. 将需要使用的培养板置于冰浴，将培养的细胞与基质胶混合，用移液枪头使其悬浮于基质中。加入浓度为 150-200μL/cm2 生长面积的基质胶。
3. 在 37℃放置 30 分钟，可成胶。可以加入细胞培养的基质，也可使细胞直接生长在胶表面。
三、薄层包被方法：
1. 冻融后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状。
2. 根据使用需要，采用无血清培养基稀释基质胶。根据实验需要确定最佳包被浓度。
3. 将稀释的 基质胶包被于所需的培养器皿中，包被量至少覆盖整个器皿的生长表面。室温下孵育 1 小时。
4. 去除未结合的基质胶，用无血清培养基轻轻地冲洗。
四、胚胎干细胞 ES 和诱导多能干细胞 ips 培养
1. 在冰上解融一份分装的基质胶。
2. 在50 mL离心管中加入24 mL的预冷的DMEM/F-12，并且放在冰上。
3. 将解融的基质胶按一定稀释比例（如1:100）加入到预冷的 DMEM/F-12中（在50 mL离心管中），混匀。
4. 稀释好的基质胶溶液必须立即使用，进行培养皿的包被。推荐的包被体积参见下表。
培养皿 | 稀释后的基质体积 |
6孔培养板 | 1 mL/孔 |
10 mm培养皿 | 6 mL/培养皿 |
T-25培养瓶 | 3 mL/培养瓶 |
T-75培养瓶 | 8 mL/培养瓶 |
5. 轻轻晃动培养皿，将基质胶溶液均匀的覆盖到培养皿的表面。
注意：如果培养皿的表面没有被基质胶溶液wanquan覆盖，则不能用于人ES和iPS细胞培养。
6. 培养皿使用前至少在室温(15 - 25°C)孵育1个小时，不可使基质胶蒸发。
注意：如果不是立即使用，包被好的培养皿必须密封防止基质胶溶液的蒸发，包被后可以在2 - 8°C放置一周。在使用之前，至少在室温（15 - 25°C）中放置30分钟恢复到室温。
7. 轻轻的将培养皿的一侧倾斜，使多余的基质胶溶液在一侧的边缘汇聚。通过移液器或者泵吸取多余的基质胶溶液。确保包被的表面没有被刮到。
8. 立即加入ES细胞培养基（例如，6孔板每孔2 mL）。
注意事项：
1. 收到产品并确认到货情况无异常后，请将基质胶储存于-80℃冰箱，短暂使用可置于-20℃冰箱。切勿将基质胶储存于自动除霜的冰箱中。在第一次融化后请分装保存，应避免基质胶反复冻融。
2. 因基质胶在10℃以上即可成胶，在操作过程中，保持基质胶一直置于冰上，所有接触的细胞培养器皿，移液吸头，分装管等都必须预冷后使用。
3. 所有操作均需在无菌环境下进行，试剂瓶瓶盖可用70％乙醇擦拭，并自然干燥。应使用预冷的移液器以保证基质胶呈匀浆状。
4. 溶解时可将基质胶基质置于 4℃冰箱内冰上过夜溶解。成胶后基质胶可以在 4℃ 24－48 小时后重新呈液态。
