F0202O-100T 反转录试剂盒(独立引物)
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兰博利德的企业使命 — 助力生物科研，促进生物科技发展！
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详细信息
反转录试剂盒（Primer Flexible）
产品货号：F0202O
存储条件：-20°C
产品组分：
组分 | 规格 |
RTase III Primer Flexible All-in-One Mix | 400 μl |
Oligo(dT)20VN (50 μM) | 100 μl |
Random hexamers (50 μM) | 100 μl |
Nuclease-Free Water | 2×1 ml |
产品简介
RTase III Primer Flexible All-in-One Mix是一款高效、便减少污染的高质量一链cDNA合成预混液， 包含M-MLV GIII Reverse Transcriptase及其反应 Buffer、RNA 酶抑制剂、dNTPs等一链 cDNA 合成所需的多种组分，还需加入RNA 模板、引物和水即可开始反应，操作非常方便。针对不同实验设计可灵活使用不同类型的逆转录引物，满足多样化的实验需求，可根据不同实验场景选择Oligo(dT)20VN 或Random hexamers 或 Gene Specific Primers。使用该逆转录预混液 15 分钟内最长可获得12 kb大小的cDNA。
使用方法
1.于冰上配制如下反应体系：
试剂 | 使用量 |
模板 RNAa | 50 ng~1 μg |
RTase III Primer Flexible All-in-One Mix | 4 μl |
Oligo(dT)20VN (50 μM) | 1 μl |
或 Random hexamers (50 μM) | 1 μl |
或 Gene Specific Primers (50 μM) | 0.1 μl |
Nuclease-Free Water | To 20 μl |
a.推荐使用试剂盒提取的已去除基因组 DNA 污染的高质量 RNA 作为模板。
2.轻柔吸打混匀，瞬离；
3.55℃温育 15 min；
注：若目标 RNA 不含 Poly(A) 结构，可预先 25℃温育 10 min。
4.反应结束后，85℃温育 5 min 以终止反应；
5.将获得的cDNA 溶液置于冰上，用于后续实验；或立即保存于 -20℃。
注：
1.后续实验为克隆实验，若RNA 来源于真核生物，只需使用 Oligo (dT) VN 即可， 加入 Random hexamers 会降低全长 cDNA 的产量；若 RNA 来源于原核生物，只需使用 Random hexamers 或 Gene Specific Primers。
2.后续实验为qPCR，请同时加入Oligo(dT) VN和Random hexamers以获得mRNA不同位置逆转录效率均一的cDNA。
注意事项
为了防止 RNase 污染，请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证 RNasefree。
