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60209ES10 嘌呤霉素盐酸盐溶液
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企业简介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白质改造和酶进化技术为驱动，聚焦生命科学产业链上游核心原料，从事分子、蛋白和细胞三大品类生物试剂的研发、生产与销售的高新技术企业，通过打通分子酶、蛋白、抗体、核酸、细胞的技术开发路径，成为国内少数同时覆盖三大品类生物试剂、兼备核心技术自主研发能力和规模化生产能力的高新技术企业，产品广泛应用于生命科学研究领域、诊断与检测领域和生物医药领域。
主营业务
公司凭借在蛋白质改造和酶进化领域的技术优势和深耕生物试剂行业多年积累的丰富经验，构建了品质优良、类型齐全、种类丰富的产品管线。自公司成立以来，公司研发、生产和销售的生物试剂超过3000种，涵盖分子、蛋白、细胞三大品类的生物试剂，能够满足客户多种类型生物试剂的一体化采购需求。公司核心产品覆盖qPCR系列、NGS系列、逆转录系列、核酸提取与纯化系列、PCR系列、分子克隆系列、体外转录系列、抗体、蛋白纯化系列、蛋白分析系列、重组蛋白、细胞分析系列、细胞培养系列、细胞转染系列、报告基因检测系列等多个品类的生物试剂，广泛应用于生命科学研究、诊断检测和生物医药等领域。
发展历程
荣誉资质
翌圣生物通过申请商标和软件著作权的方式保障核心技术和市场竞争力，不断加强公司品牌建设。截至2022年3月31日，公司已经获得授权18项（其中发明14项、实用新型1项、外观设计3项）和45项与生物试剂相关的软件著作权，拥有经国家知识产权局商标局核准的注册商标权37项以及4项境外注册商标，是国家高新技术企业和上海市专精特新企业。
创新平台
经过多年的产品研发技术经验的沉淀以及持续的研发创新，翌圣生物积极开展“产学研”合作，与拥有生物催化与酶领域国家重点实验室的湖北大学、拥有教育部工业生物领域重点研究基地的江南大学展开合作，优化生物试剂关键原料的生产和表达工艺。翌圣生物以基因工程技术、生物信息技术、细胞生物学技术、免疫学技术、生化分析技术等生命科学领域的共性生物技术为基础，建立了六大核心技术平台——双向分子酶理性设计与定向进化平台、密度发酵与超洁净纯化平台、分子诊断试剂关键原料研发平台、高通量测序建库试剂创新研发平台、高性能单克隆抗体研发平台和mRNA医药应用研发平台，目前已经自主研发出20项核心技术，打通分子酶、蛋白、抗体、核酸、细胞的技术开发路径，覆盖技术研发、产品升级、规模生产和质量控制等生物试剂研发和生产的各关键环节。
工业化生产
翌圣生物拥有按照准GMP 标准建设运营的工业化生产基地，配有吨级发酵线、工业级 AKTA 纯化线和全自动包装线。同时，公司通过了ISO 13485:2016质量管理体系认证，从原料控制、生产管理、质检管控、仓储运输等对生产线进行360度管理监督，保证产品过程的可控制性及可追溯性，竭尽全力为您提供可靠的产品。
客户服务
翌圣生物凭借优质稳定的产品质量、高效及时的响应能力、快速稳定的交付能力和周到完备的售后服务获得了众多科研用户和工业用户的认可，为检测公司、治疗公司、工具类公司和科学研究实验室提供应用于科学研究、体外诊断、基因测序、生物医药等的生物试剂。与中国科学院、清华大学、北京大学、复旦大学、上海交通大学、浙江大学等顶尖科研院所和华大基因、恒瑞医药、药明康德、之江生物、圣湘生物、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工业客户建立了稳定、紧密的合作关系，公司产品被多次使用在Nature、Science、Cell等国际顶级期刊论文发表中。
公司企业文化
帮助客户创造价值，让世界更健康更快乐
◎ 成为生命科学工具领域全球Top⑩
◎ 具备驱动产业变革的技术创新能力
◎ 拥有一支持续学习型的翌圣铁军
翌圣生物始终秉承“帮助客户创造价值，让世界更健康更快乐”的使命，专注于技术创新和产品升级，不断拓展核心技术的应用领域，为客户提供更为的产品与服务，助力我国打造自主可控的生物试剂产业链。同时，翌圣生物将进一步推进国际化战略，继续布局和拓展海外市场，为全球生物试剂产业发展贡献力量。
详细信息
嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑链霉菌(Streptomyces alboniger)发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3´末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(PAC)，赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。
嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。
本品是无菌的、溶于蒸馏水的嘌呤霉素盐酸盐溶液，浓度为10 mg/mL（10 mg/mL in H2O），可直接用培养基或其他缓冲溶液稀释使用，适用于细胞培养，常用工作浓度为1~10 µg/mL。
产品信息
货号 | 60209ES10/60209ES50/60209ES60/60209ES76 |
规格 | 1×1 mL/5×1 mL/10×1 mL/50×1 mL |
CAS号（CAS NO.） | 58-58-2 |
分子式（Molecular Fomular） | C22H29N7O5·2HCl |
分子量（Molecular Weight） | 544.43 g/mol |
纯度（Purity） | ≥98% |
外观（Appearance） | 溶液 |
浓度 （Concentration） | 10 mg/mL（溶于水） |
结构（Structure） |
|
组分信息
组分名称 | 60209ES10 | 60209ES50 | 60209ES60 | 60209ES76 |
规格 | 1×1 mL | 5×1 mL | 10×1 mL | 50×1 mL |
储存条件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用说明
1. 建议使用浓度
哺乳动物细胞：1~10 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定。推荐浓度，请看表1。
大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125 μg/mL。
【注】：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。
表1 嘌呤霉素盐酸盐的推荐浓度
细胞系 | 嘌呤霉素浓度 | 参考文献 |
B16（小鼠黑素细胞） | 1~2 μg/mL | [1],[2] |
HEK293（人胚胎肾细胞） | 0.5~10 μg/mL | [3] |
HeLa（人宫颈癌细胞） | 1~10 μg/mL | [4]，[5] |
MEF（小鼠成纤维细胞） | 1-5 μg/mL | [4] |
HepG2（人肝细胞癌） | 0.5~5 μg/mL | [6]，[7] |
A549（肺癌细胞） | 1.5 μg/mL | [8] |
人胚胎干 (ES) 细胞 | 0.5~5 μg/mL | [9] |
嘌呤霉素杀灭曲线的确定（以shRNA转染或者慢病毒转导为例）
嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线(kill curve)。
1）Day 1：24孔板内以5~8×104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔，以确保后续的梯度实验的进行，37℃细胞孵育过夜。
2）Day 2：①准备筛选培养基：含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0~15 μg/mL，至少5个梯度）；②往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基；之后37℃孵育细胞。
3）Day 4：更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率。
4）根据细胞的生长状态，约2-3天更换新鲜的筛选培养基。
5）每日监测细胞，观察存活细胞率，确定抗生素筛选开始4~6天内有效杀死非转染或所有非转导细胞的药物浓度。
3. 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选
等转染含有pac基因的质粒后，细胞在含有嘌呤霉素的培养基中增殖，以筛选出稳定转染子。
1）细胞转染48 h后，将细胞（原样或稀释）置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。
【注】：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用。细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降。最好进行细胞分盘使其密度不超过25%。
2）每隔2~3天，移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。
3）筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间，这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。
【注】：每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要48 h，有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3-10天。
4）转移和放置5~10个抗性克隆到一个35 mm的培养皿中，用选择培养基继续培养7天。此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。
注意事项
1.嘌呤霉素为有毒化合物，操作时请小心拿放。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3.本产品仅用于科研用途，禁止用于人身上。
参考文献
[1] Furge KA. et al., 2001. Suppression of Ras-mediated tumorigenicity and metastasis through inhibition of the Met receptor tyrosine kinase. PNAS 98:10722-7.
[2] Díaz J. et al., 2014.Rab5 is required in metastatic cancer cells for Caveolin-1-enhanced Rac1 activation, migration and invasion.. J Cell Sci. 127:2401-6.
[3] Rössger K. et al., 2013. Reward-based hypertension control by a synthetic brain-dopamine interface. PNAS, 110:18150-5.
[4] Kamer I. et al., 2005. Proapoptotic BID Is an ATM effector in the DNA-damage response Cell. 122:593-603.
[5] Charnaux N. et al., 2005. RANTES (CCL5) induces a CCR5-dependent accelerated shedding of syndecan-1 (CD138) and syndecan-4 from HeLa cells and forms
[6] Gao J , Zhao N , Knutson M D , et al. The Hereditary Hemochromatosis Protein, HFE, Inhibits Iron Uptake via Down-regulation of Zip14 in HepG2 Cells[J]. Journal of Biological Chemistry, 2008, 283(31):21462-8.
[7] Huang J , Dibble C C , Matsuzaki M , et al. The TSC1-TSC2 complex is required for proper activation of mTOR2[J]. Molecular and Cellular Biology, 2008, 28(12):4104-4115.
[8] Nasser M W , Datta J , Nuovo G , et al. Nasser MW, Datta J, Nuovo G, Kutay H, Motiwala T, Majumder S, Wang B, Suster S, Jacob ST, Ghoshal KDown-regulation of micro-RNA-1 (miR-1) in lung cancer. Suppression of tumorigenic property of lung cancer cells and their sensitization to doxorubicin-induced apoptosis by miR-1. J Biol Chem 283: 33394-33405[J]. Journal of Biological Chemistry, 2008, 283(48):33394-33405.
[9] Paatero A O , Hilkka T , Happonen L J , et al. Bacteriophage Mu integration in yeast and mammalian genomes[J]. Nucleic Acids Research, 2008, 36(22):e148-e148.
客户使用本产品发表的科研文献（部分）
[1] Zhang D, et al. A non-canonical cGAS-STING-PERK pathway facilitates the translational program critical for senescence and organ fibrosis. Nat Cell Biol. 2022 May;24(5):766-782. doi: 10.1038/s41556-022-00894-z. Epub 2022 May 2. PMID: 35501370.
[2] Lu T, et al. CD73 in small extracellular vesicles derived from HNSCC defines tumour-associated immunosuppression mediated by macrophages in the microenvironment. J Extracell Vesicles. 2022 May;11(5): e12218. doi: 10.1002/jev2.12218. PMID: 35524455; PMCID: PMC9077142.
[3] Chen S, et al. Identification of ubiquitin-specific protease 32 as an oncogene in glioblastoma and the underlying mechanisms. Sci Rep. 2022 Apr 19;12(1):6445. doi: 10.1038/s41598-022-09497-y. PMID: 35440702; PMCID: PMC9018837.
[4] Han L, et al. Uterus globulin associated protein 1 (UGRP1) binds podoplanin (PDPN) to promote a novel inflammation pathway during Streptococcus pneumoniae infection. Clin Transl Med. 2022 Jun;12(6): e850. doi: 10.1002/ctm2.850. PMID: 35652821; PMCID: PMC9161880.
[5] Sun Q, et al. MORTALIN-Ca2+ axis drives innate rituximab resistance in diffuse large B-cell lymphoma. Cancer Lett. 2022 Jul 1; 537:215678. doi: 10.1016/j.canlet.2022.215678. Epub 2022 Apr 18. PMID: 35447282.
