猴前列腺素I合酶(PTGIS)酶联免疫试剂盒
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详细信息
猴前列腺素I合酶(PTGIS)酶联免疫试剂盒
ELISA试剂盒组成
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | |
密封袋 | 1个 | 1个 | |
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品：36U/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
样品稀释液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片（48） | 2片（96） |
ELISA实验原理
本试剂盒基于检测样本的特异性抗体包被酶标板，加入待测样本，样本与包被在酶标板上的特异性抗体结合，形成免疫复合物。清洗后加入酶标二抗，与免疫复合物结合，形成完整的三明治复合物。再加入底物溶液，底物在酶的作用下变色，颜色的深浅与样本的浓度呈正相关。最后加入终止液，使反应停止，在450nm波长下测量各孔的光密度值（OD值），通过标准曲线计算样本的浓度。
操作步骤
1. 加样：设置空白孔、标准孔和待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl。注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。每次实验都应制作标准曲线。如果样品浓度过高，可以用样品稀释液进行稀释，使样品符合试剂盒的检测范围。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物su标记抗体工作液 100μl（取1μl生物su标记抗体加99μl生物su标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
3. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物su标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
5. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
6. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进行检测。
猴前列腺素I合酶(PTGIS)酶联免疫试剂盒
ELISA试剂盒实验数据的计算处理方法
1、拟和曲线：
输入第一行： 浓度值， 如0 10 50 100 400
输入第二行：该浓度下的调整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42
选择这些输入的数据，用插入里的图表按钮，进入图表向导，在“标准类型”中选择“xy散点图”;在“子图表类型”中选择“折线散点图”，按“下一步”;选择“系列产生在行”，按“下一步”;数据标志，可以填写：如数据y轴，OD值;数据x轴，浓度;按下一步，点击完成。可得曲线图。
单击曲线，按右键，选择“添加趋势线”，在类型中，选择多项式;在选项中，选择显示公式，选择显示R平方值。
得到公式和R平方值。
也可以用上面说的方法： 双击图表，把它输入到图表的数据中，就可以拟和曲线。
2、计算浓度：
第一次实验：
标准曲线为：
y = -4E-05x2 + 0.026x
R2 = 0.9745
为例，已知OD值，计算浓度。
由于y = -4E-05x2 + 0.026x，可以得到：
4E-05x2 -0.026x +y=0
ax2 +bx +y=0
操作注意事项
1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 浓度为 0 的标准品可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，终结果乘以5才是样本终浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
6. 若中英文说明书有误，请以中文说明书为准。
7. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。
8. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
产品包装：盒装
性状：瓶装液体
规格：96T/48T
保存条件：2-8℃
保存期限：6个月
运输条件：2-8℃低温运输，用干冰或者生物冰袋低温运输。
组织匀浆
1） 用预冷的PBS（0.01M，PH7.4）冲洗组织以除去表面残留的血液或杂质（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果）。
2） 将组织块称重，然后切成尽可能小的碎块，以便充分匀浆。
3） 加入适量的预冷PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂），用玻璃匀浆器在冰上或冰浴中充分匀浆。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。
4） 将匀浆液吸入离心管中，2-8℃下以5000×g离心5分钟，收集上清液，保存至-20℃或-80℃，避免反复冻融。
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