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A2250 RAPA3G SYBR Green qPCR Mix试剂
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上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科学领域，提供科研类试剂、耗材、仪器、技术服务的生物企业。包括分子生物学、免疫学、微生物学、细胞学等 。旗下拥有 “雅吉生物”、“晶风生物”、“彩佑实业”、“GTX” 品牌。通过公司各部门员工的共同努力在行业内享有一定的声誉，深得新老客户厚爱。本着“服务、诚信、进取”的精神，坚持沟通你我，创新服务，为国内外广大用户提供产品和服务。
雅吉生物专营ATCC细胞，种类齐全，服务周到，欢迎新老客户咨询订购。ATCC成立于1925年，是很大的生物资源中心，由美国14家生化、医学类行业协会组成的理事会负责管理，是一家非盈利生物标准品资源中心。ATCC发布其获取、鉴定、保存及开发的生物标准品，推动科学研究的验证，应用及进步。
目前，ATCC可以提供以下类别生物标准品：细胞株（3000多种）；菌株（15000多种）；动植物病毒株（2500多种）以及重组物质等。
本公司郑重承诺：质量稳定、供货及时。
详细信息
RAPA3G SYBR Green qPCR Mix试剂本制品是采用 SYBR Green 嵌 合 荧 光 法 进 行
Real-Time PCR 的专用试剂，本 SYBR Green qPCR Mix
将化学修饰的热启动 RAPA3G DNA 聚合酶、反应 Buffer、
dNTP、SYBR Green 染料等试剂预混在一起，是一种 2×浓
度的单组分预混试剂。该制品配有单独的 ROX 内参染料，
可用于需要 ROX 进行孔间校正的定量 PCR 仪。
RAPA3G DNA 聚合酶为第三代 DNA 聚合酶，其具有最
高的杂质耐受性（对乙醇、胍盐、肝素具有的耐受性），
因此对于纯度较差的 DNA 模板，该 Mix 仍然可以获得理想
的实验结果。RAPA3G DNA 聚合酶为化学法修饰的 HotStart
版本，其在 50℃以下 100%无活性，只有 95℃条件下加热
5min 后才能恢复酶的活力。因此该系统可以有效抑制
非特异性 PCR 扩增，极大的提高了 PCR 扩增特异性。该试
剂盒的反应缓冲液，可在宽范围中得到良好的扩增结
果、检测灵敏度更高、信号更强。
包装
规 格
2×RAPA3G SYBR
Green qPCR Mix
50×ROX Dye
1ml （A2250A） 1 ml 200 μl
5ml （A2250B） 1 ml×5 200 μl
储存：
请避光置于-20℃以下可保存３年。该试剂经 30 次冻融后性
能无下降，因此不使用时请置于-20℃避光保存。操作方法
1. 根据机型选择步骤 A 或 B
A: 需要添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的 Real-Time
PCR 仪，包括：ABI PRISM7900HT, 7300/7500/7500 Fast
Real-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P
(Stratagene)等。按照如下组分配制 20 μl PCR 反应体系：
终浓度
2×RAPA3G SYBR Green qPCR Mix 10 μl 1×
50×ROX Reference Dye 0.4 μl 1×
PCR Forward Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
PCR Reverse Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
DNA 模板 0.5~2 μl
ddH2O Up to 20 μl
注意：引物用量有时可提高到 0.8 μl 以提高扩增效率。
B:无需添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的 Real-Time
PCR 仪，包括：LightCycler (Roche Diagnostics)； CFX96
Real-Time PCR(Bio-Rad & MJ)；Line-Gene(Bioer，杭州博
日)等。按照如下组分配制 20 μl PCR 反应体系：
终浓度
2×RAPA3G SYBR Green qPCR Mix 10 μl 1×
PCR Forward Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
PCR Reverse Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
DNA 模板 0.5~2 μl
ddH2O Up to 20 μl
2. 进行 Real-Time PCR 反应,通常采用两步法，程序如下：
Stage 1: 95℃ 5min*
Stage 2: 95℃ 10s
60℃ 20s 40 cycles
Stage 3: Dissociation analysis
注意：由于该酶为化学修饰的热启动 RAPA3G DNA 聚合酶，必须于 95℃
加热 5min 才能恢复酶的活性，该热启动步骤不能缩短时间。
3. 反应结束后确认 Real-Time PCR 的扩增曲线、融解曲线
和标准曲线。R
恒温扩增使用策略及实例展示
应用实例1：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）
以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起始前，下图为 65 度反应 30min 后。
应用实例2：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。
应用实例3： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
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