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A2262 RAPA3G Probe qPCR MasterMix试剂
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生产厂家上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月,是一家面向生命科学领域,提供科研类试剂、耗材、仪器、技术服务的生物企业。包括分子生物学、免疫学、微生物学、细胞学等 。旗下拥有 “雅吉生物”、“晶风生物”、“彩佑实业”、“GTX” 品牌。通过公司各部门员工的共同努力在行业内享有一定的声誉,深得新老客户厚爱。本着“服务、诚信、进取”的精神,坚持沟通你我,创新服务,为国内外广大用户提供产品和服务。
雅吉生物专营ATCC细胞,种类齐全,服务周到,欢迎新老客户咨询订购。ATCC成立于1925年,是很大的生物资源中心,由美国14家生化、医学类行业协会组成的理事会负责管理,是一家非盈利生物标准品资源中心。ATCC发布其获取、鉴定、保存及开发的生物标准品,推动科学研究的验证,应用及进步。
目前,ATCC可以提供以下类别生物标准品:细胞株(3000多种);菌株(15000多种);动植物病毒株(2500多种)以及重组物质等。
本公司郑重承诺:质量稳定、供货及时。
RAPA3G Probe qPCR MasterMix试剂将热启动 RAPA3G
DNA 聚合酶、反应 Buffer、dNTP 染料等试剂预混在一起,
是一种 2×浓度的单组分预混试剂。该制品不含有 ROX 校正
染料,适用于各种荧光标记探针,并且适用于各种定量 PCR
机型。优化的反应缓冲液,使得该制品可用于单重及多重的
探针法定量 PCR。
制品中的 RAPA3G DNA 聚合酶为第三代 DNA 聚合酶,
其具有最高的杂质耐受性,其对乙醇、胍盐、肝素、血清、
植物多糖多酚具有的耐受性,因此可用于粗样品的直接
定量 PCR 检测(Direct PCR)。该酶经化学法修饰,在 50℃
以下 100%无活性,只有 95 度条件下加热 5min 后才能
恢复酶的活力。因此该系统可以有效抑制非特异性 PCR 扩
增,极大的提高了 PCR 扩增特异性。
由于 RAPA3G DNA 聚合酶对 dUTP 具有的识别能
力,该制品中的 dTTP 核酸碱基被 dUTP 所取代,因此
扩增产物均包含 dUTP,在配合热敏 UDG(该酶在 95℃热
变性 5min 后不可逆失活,不影响后续 PCR 反应)的条件下
能达到最佳的防污染能力。在 10e5 copies 污染物的测试条
件下,Ct 推迟 15 个以上(污染去除能力>99.997%)。
包装
2×RAPA3G Probe MasterMix (with UDG)
A2262A 1 ml
A2262B 25 ml
储存:-20℃可保存 2 年。短期使用可放置 2-8℃,保存 3 个
月。如出现白色沉淀溶解后使用,不影响反应性能。该试剂
经 30 次冻融后性能无下降,因此不使用时请置于-20℃避光
保存。
RAPA3G DNA 聚合酶对抑制物耐受性
SDS 0.01% Serum 2%
EtOH 5% Plasma Citrate 2%
Heparin 0.1IU/ml Gua SCN 0.25%
Hematin 30μM Trizol 0.5%操作方法
1、按照如下组分配制 20 μl PCR 反应体系:
终浓度
2×RAPA3G Probe MasterMix(with UDG) 10 μl 1×
Primer F1 (20 μM) 0.1-0.4 μl 0.1-0.4 μM
Primer R1 (20 μM) 0.1-0.4 μl 0.1-0.4 μM
Probe1 (20 μM) 0.1-0.4 μl 0.1-0.4 μM
其它引物和探针 X
DNA 模板 0.5~2 μl
ddH2O Up to 20 μl
2. 进行 Real-Time PCR 反应,通常采用两步法,程序如下:
Stage 1 25℃ 2 min 去污染
Stage 2 95℃ 5 min 热启动
Stage 3
40 循环
95℃ 5 s 变性
60℃ 30 s 收集信号 退火/延伸
注意:退火延伸温度可在 55-65℃调整
3. 在多数情况下,采用两步法程序可获得理想的扩增效果,
在无法达到预期理想效果的情况下,也可采用三步法 PCR
程序,程序如下:
Stage 1 25℃ 2 min 去污染
Stage 2 95℃ 5 min 热启动
Stage 3
40 循环
95℃ 5 s 变性
55℃ 10 s 退火
72℃ 30 s 收集信号 延伸
4. 反应结束后确认 Real-Time PCR 的扩增曲线和标准曲
线。R Gre
注意:消化污染步骤中的温度设置可在 25-37℃之间均可,无显著
差异,但高于 42℃以上的温度会导致热敏 UDG 消化能力急剧下降。
恒温扩增使用策略及实例展示
应用实例1:A3825-01 红黄变色反应(肉眼观察)
以 体外转录 RNA 为模板,1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起始前,下图为 65 度反应 30min 后。
应用实例2:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
应用实例3: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
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