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起订量：
92-01-348 NK细胞分选试剂盒
- 型号
- 92-01-348
- 参数
- 产地类别:国产
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详细信息
NK细胞分选试剂盒可用于从小鼠脾脏单细胞悬液中分离未经标记的NK 细胞。非NK细胞(T细胞、DC 细胞、B细胞、粒细胞、巨噬细胞、红系细胞)被生物素化的抗体和识别生物素的磁珠标记通过去除这些非NK细胞，从而得到高纯度的NK细胞。
其分选原理为：用生物素结合的单克隆抗体混合物(作为一级标记试剂)和与磁珠结合的抗生物素单克隆抗体(作为二级标记试剂)对非靶细胞进行间接磁性标记。磁性标记的非目标细胞在分选器的磁场中被保留在分选柱中，而未标记的NK 细胞则通过分选柱流出。
试剂和仪器要求
缓冲液（pH7.2 PBS，0.5% BSA、2mM EDTA， 2~8℃）
分选柱和分选器。
(可选)荧光偶联的抗体用于流式分析。
(可选)PI或7-AAD可以用于流式分析中排除死细胞。
(可选)死细胞清除试剂盒用于死细胞的清除。
(可选)预分离过滤器去除细胞团块。
操作步骤
一、样本准备
使用手动方法或组织解离器制备脾脏单细胞悬液。
二、磁珠标记
1.细胞计数。
2.300xg离心10分钟。去除上清。
3.每107个细胞总量使用 40μL缓冲液重悬。
4.每107个细胞总量添加 10μLNK细胞生物素抗体混合物。
5.混匀，2-8℃孵育 5分钟。
6.每107个细胞加入 2mL缓冲液洗涤细胞，300xg离心10分钟，去上清。
7.每107个细胞添加 80μL 缓冲液。
8.每107个细胞添加 20μL抗生物素磁珠。
9.混匀，2-8℃孵育 10分钟。
10.(可选)添加染色抗体。
11.进行细胞分选步骤。
三、细胞分选
xM或xL分选柱进行细胞分选
1.将分选柱置于相对应的分选器中。
2.用适当体积的缓冲液润洗分选柱（xM: 500 μL； xL: 3mL）
3.将细胞悬液转移至分选柱中。收集含有未标记细胞的流出液，即 NK细胞。
4.加适量的缓冲液，收集总流出物，并与步骤 3中的流出液混合，这是NK细胞。（ xM: 500 μL；xL: 3mL）
5.(可选 )将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。加适量的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是磁性标记的非NK细胞。（ xM: 1mL；xL: 5mL）
储存温度
2-8℃避光保存，请勿冷冻。有效期见试剂外标签。
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