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特色新产品

概述

翻译后乙酰化发生在赖氨酸残基的ε-氨基上，作为一种可逆且高度动态的PTM，已知其是多种细胞事件的关键调节因子，包括染色质结构、转录、代谢、信号转导和细胞骨架调节。

主要功能

首乙酰赖氨酸研究者的优化试剂盒

分析细胞或组织样品中内源性或转染蛋白的乙酰化

最完整的乙酰化蛋白质图谱

化学计量分析带来更深入的机理见解

查看备受关注的Signal™Seeker工具箱的新增内容（如下）

新格式-信号导引头乙酰赖氨酸检测试剂盒（目录号BK163-S.15测定）

新格式-信号导引头乙酰赖氨酸检测试剂盒（目录号BK163，30个测定）

新-信号导引头乙酰赖氨酸检测试剂盒-AAC03（目录号BK164，30个测定）

新格式-乙酰赖氨酸亲和珠（AAC0

乙酰赖氨酸亲和珠-AAC04

乙酰赖氨酸亲和珠（40次测定）

当使用乙酰赖氨酸亲和珠时，这种新的通用形式可以进行更精确的控制

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作为Signal Seeker™产品线的一部分，AAC04乙酰赖氨酸亲和珠经过优化，可检测赖氨酸乙酰化蛋白的内源性水平。乙酰赖氨酸亲和珠的新的、通用的形式被提供为已经与G蛋白珠化学缀合的AAC02珠（克隆7B5A1）和AAC03珠（克隆10C4B2.1）。这些珠子可以在1:1的混合物中组合以生产AAC04珠子，并且新的形式在研究乙酰赖氨酸PTMs时提供了很大的灵活性和准确性。验证研究表明，这些珠子可以免疫沉淀广泛的赖氨酸乙酰化蛋白，在IP测定中，重链或轻链的可检测浸出量最小。还提供了一种全面的Signal Seeker™乙酰赖氨酸检测试剂盒（BK163），建议首使用。

验证数据：乙酰赖氨酸亲和珠白书

每批亲和珠都经过质量控制，以提供高批次间的一致性，请参阅COA文件。

已验证的应用程序

应用1：使用AAC02珠、AAC03珠或组合珠（AAC04珠）进行总乙酰赖氨酸图谱的免疫沉淀检测——新的AAC04珠格式可以实现所有3种选择

使用AAC02珠、AAC03珠和AAC04珠（50µl珠浆）对用脱乙酰酶抑制剂[TSA（1µM）和烟胺（1mM）]处理（+）或未处理（-）的Cos-7细胞的乙酰化蛋白进行IP处理6小时。用AAC03-HRP抗体（1:3000）洗脱并通过蛋白质印迹分析富集的乙酰化蛋白的总图谱。使用小鼠IgG珠作为非特异性结合的对照（Cat#CIG02）。每个IP测定使用1 mg Cos-7裂解物。

应用2：使用AAC02珠粒、AAC03珠粒或组合珠粒（AAC04珠粒）免疫沉淀靶特异性乙酰化蛋白——所有3种选择都可以使用新的AAC04珠体形式

AAC03珠粒和AAC02珠粒（50µl珠浆）和1:1混合物（各25µl）AAC04珠粒用于脱乙酰酶抑制剂[TSA（1µM）和烟胺（1mM）]处理（+）或未处理（-）的Cos-7细胞的乙酰化蛋白IP 6小时。使用抗EGFR和抗RhoGDI抗体进行蛋白质印迹分析，并使用LiCor-Empiria软件对信号进行定量。还进行IP测定，并对小鼠IgG对照珠的信号进行定量（印迹未显示）。每个IP使用1 mg裂解物。

应用3：从组织样品中免疫沉淀乙酰化蛋白

用BlastR缓冲液获得小鼠组织提取物（肝脏和心脏）。在1mg组织提取物中使用AAC04珠粒（60μg）或mIgG对照珠粒（#CIG02，60µg）进行IP。用SDS-PAGE分离富集的蛋白质，并用AAC03-HRP（1:3000）进行蛋白质印迹分析。

bk163_问题

使用AAC04亲和珠、细胞信号乙酰赖氨酸抗体和免疫化学乙酰赖氨肽亲和珠富集总乙酰赖氨蛋白

使用各种乙酰赖氨酸亲和试剂来IP来自用TSA（1μM）和烟胺（1mM）处理（+）或未处理（-）6小时的Cos-7细胞的乙酰化蛋白。（1） 16.7 ml AAC04珠浆（20μg抗体）。（2） 50ml AAC04珠浆（60μg抗体）。（3） 抗乙酰赖氨酸兔单克隆混合物（细胞信号，按照制造商说明1:100）。（4） ImmuneChem乙酰赖氨酸亲和珠（40μg抗体）。（5） ImmunChem乙酰赖氨酸

Signal Seeker®乙酰赖氨酸检测试剂盒-AAC03珠子（30次测定）

信号导引头乙酰化检测试剂盒-AAC03珠（30次测定，免疫沉淀形式）

药/包装

细节

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Signal Seeker™生产线的开发允许专家和非专家对关键的调节蛋白修饰进行简单分析。全面的Signal Seeker™试剂盒提供了一个亲和珠系统，用于从任何给定的细胞或组织裂解物中分离和富集修饰蛋白。然后使用靶蛋白的一级抗体通过标准的蛋白质印迹程序分析富集的蛋白质群体。

Cytoskeley提供两种乙酰赖氨酸检测试剂盒，BK163和BK164。BK163是通用的试剂盒，因为它包含两种类型的乙酰赖氨酸亲和珠，AAC02珠（克隆7B5A1）和AAC03珠（克隆10C4B2.1），它们已与G蛋白珠化学偶联。这些珠子可以以1:1的混合物组合以生产AAC04珠子，并且这种形式在研究乙酰赖氨酸PTM时提供了很大的灵活性和精度。验证研究表明，这些珠子可以免疫沉淀

产品用途包括

调查瞬态调节机制

测量多途径成员蛋白的信号事件

发现感兴趣的蛋白质的新修饰

深入了解监管机制

测量内源性或瞬时表达的蛋白质信号事件

这些套件有许多应用程序，我们在这里介绍了概述和有趣的示例：

Signal Seeker®试剂盒BK164仅使用AAC03亲和珠，如果已确定AAC03比替代乙酰赖氨酸亲和珠Cat#AAC02对POI的富集更好，则应使用该试剂盒。

应用1显示了表皮生长因子受体（EGFR）和RhoGDI的IP。在该实施例中，如果研究EGFR或RhoGDI乙酰化，则建议单独使用AAC03珠。AAC03珠粒已被证明对广泛的乙酰化蛋白具有非常强的富集作用（见申请2）。

当检查新的乙酰化状态时

应用2：目标和总乙酰化剖面的测定

使用来自试剂盒BK164的乙酰裂解物亲和珠（AAC03珠）从1mg Cos-7细胞裂解物中免疫沉淀（IP）内源性乙酰化蛋白。使用HRP标记的泛抗乙酰基抗体（试剂盒BK164中提供），通过蛋白质印迹检测来分析IP的目的蛋白（POI）、EGFR和RhoGDI，或总乙酰基体。用HDAC抑制剂TSA（1uM）和烟胺（1mM）处理（+）或未处理（-）赖氨酸6小时。

试剂盒内容

乙酰赖氨酸试剂盒包含以下成分：

裂解和蛋白质定量步骤IP和预澄清步骤洗涤步骤洗脱步骤西方步骤

BlastR™裂解缓冲液

BlastR™稀释缓冲液

BlastR™过滤器

蛋白酶抑制剂鸡尾酒

HDAC抑制剂鸡尾酒

Precision Red™蛋白质测定试剂

乙酰赖氨酸亲和珠（AAC03珠）

IP控制珠

BlastR™冲洗缓冲液

旋转柱

珠子洗脱缓冲液

化学发光试剂A

化学发光试剂B

抗乙酰赖氨酸HRP抗体

在这一研究领域可以尝试的其他实验包括：

•参与靶蛋白调节的乙酰化酶和HDAC酶的药理学研究。

•研究在各种不同生长因子或药物治疗下的乙酰化作用。

•检查乙酰化靶蛋白与其下游效应物的相互作用。

•检查乙酰化和其他靶蛋白的PTM之间的串扰。

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