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胶原酶 2 型(生化试剂)
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粗制胶原酶制剂包含两种不同胶原酶的几种同工酶、一种巯基蛋白酶、氯链蛋白酶、一种类似y蛋白酶的酶和一种氨肽酶。这种胶原酶和蛋白酶活性的组合在分解细胞间基质方面非常有效,这是组织解离的关键部分。该复合物的一个组成部分是一种水解酶,它优先在天然胶原的螺旋区域中降解,特别是在序列Pro-Y-Gly-Pro中的Y-Gly键,其中YZ常是一种中性氨基酸。这种裂解产生的产品容易进一步被肽酶消化。粗制胶原酶被金属螯合剂如半g氨酸、EDTA或邻苯二酚抑制,但不被DFP抑制。它也被α2-巨球蛋白,一种大型血浆糖蛋白抑制。酶活性需要Ca2+。每种胶原酶t有的酶谱已与用于研究的细胞来源的组织(或细胞的使用目的)相关联,因此通过相关性已建立了几种类型的粗制胶原酶:类型1、2、3和4。
- 类型1粗制胶原酶具有原始的胶原酶、酪蛋白酶、氯链蛋白酶和y蛋白酶活性的平衡。
- 类型2含有较高相对水平的蛋白酶活性,特别是氯链蛋白酶。
- 类型3含有Z低水平的次级蛋白酶。
- 类型4设计为特别低的y蛋白酶活性,以限制对膜蛋白和受体的损伤。
- 类型5含有更高的胶原酶和酪蛋白酶值。
- 类型6含有高胶原酶活性,酪蛋白酶与胶原酶的比例约为2:1。设计为相对于类型I(col G)胶原酶,富含类型II(col H)胶原酶。
- 类型7含有比类型1和2胶原酶高四倍的胶原酶和酪蛋白酶活性。
- 纯化胶原酶,代码:CLSPA,含有Z少的次级蛋白水解活性以及高胶原酶活性。
无动物源类型AFA、AFB和AFC,STZ1和STZ2胶原酶是从w全不含动物成分的培养基中培养出来的,设计用于生物加工应用,其中必须防止潜在的动物源性病原体的引入。次级蛋白酶的水平与类型1和2胶原酶相似。
- CLSAFA是原始的AFA等级,设计为具有与类型1和2胶原酶相似的胶原酶和次级蛋白酶。
- CLSAFB含有比CLSAFA更高的胶原酶和酪蛋白酶活性。
- CLSAFC具有类似于类型4胶原酶的特别低的y蛋白酶活性。
- CLSAFD含有比CLSAFA高两到三倍的特定活性。
- 纯化胶原酶,代码CLSAFP含有Z少的次级蛋白水解活性以及高胶原酶活性。
- STZ1和STZ2,0.22μ过滤STEMxyme AOF胶原酶/z性蛋白酶(Dispase)混合物,用于原代细胞和干细胞的分离。
作为Biogradetech-d 家代理,艾美捷科技强烈推荐Biogradetech热销产品胶原酶,2 型。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
产品名称 | 货号 | 详情 |
胶原酶,2 型 | BGT-PEN-101 | 查看 |
胶原酶,2 型试剂:
0.05 M TES [三(羟甲基)-甲基-2-氨基乙烷磺酸]缓冲液,含0.36 mM氯化钙,pH 7.5
4%甲基纤维素溶于7.1 mM氯化锡中
0.2 M柠檬酸钠,pH 5.0
硝基羟基吲哚-柠檬酸混合液:将50 ml含7.1 mM氯化锡的4%硝基羟基吲哚甲基纤维素与50 ml pH 5.0的0.2 M柠檬酸钠混合。让混合物搅拌5分钟。
50%正丙醇
底物:Worthington牛跟腱胶原(代码:CL)和无维生素酪蛋白
50%(重量/体积)三氯醋酸
酶:将酶以1 mg/ml的浓度溶解在含有0.36 mM氯化钙(pH 7.5)的0.05 M TES中。在上述缓冲液中,稀释液分别为1/10和1/20。
程序:
称取25 mg沃辛顿牛胶原蛋白,放入四个试管中。包括至少两个管作为不含酶的空白。向试管中加入5.0 ml 0.05 M TES缓冲液,并在37°C下孵育15分钟。在适当的试管中加入0.1毫升酶稀释液,开始反应。
5小时后,通过将0.2ml溶液(留下胶原)转移到含有1.0ml茚三酮-柠檬酸混合物的试管中来停止胶原酶反应。包括酶空白(用0.1ml TES缓冲液代替酶孵育的胶原)。在沸水浴中加热20分钟。冷却后,用5毫升50%正丙醇稀释。静置15分钟,读取600nm处的吸光度。从L-l氨酸标准曲线确定相当于释放的l氨酸的微摩尔氨基酸。
非特异性蛋白酶活性(即酪蛋白酶活性)使用上述测定法测定,并用25毫克不含维生素的酪蛋白代替胶原蛋白。5小时后通过加入0.5毫升50%三l乙酸使反应停止。离心后,将0.2ml上清液转移到1.0ml茚三酮中,并如上处理。酪蛋白酶活性计算为胶原酶活性。
文献参考:
Abe, S. and Nagai, Y.
Evidence for the Presence of a Complex of Collagenase with alpha-2-Macroglobulin in Human Rheumatoid Synovial Fluid: A Possible Regulatory Mechanism of Collagenase Activity , J. Biochem. 73 , 897 , 1973
An Editorial.
Collagenase and Rheumatoid Arthritis , N Engl J Med 279 , 942 , 1968
Angleton, E. and Van Wart, H.
Preparation and Reconstitution with Divalent Metal Ions of Class I and Class II Clostridium histolyticum Apocollagenases , Biochemistry 27 , 7406 , 1988
Ashcroft, S. , Bassett, J. and Randle, P.
Isolation of Human Pancreatic Islets Capable of Releasing Insulin and Metabolising Glucose in vitro , Lancet 297 , 888 , 1971
Bagchi, N.
What Makes Silica Toxic , Br J Industrial Med 49 , 163 , 1992
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