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C0660-122 CellWorld 碘化丙啶(PI)溶液(50ug/ml)
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碘化丙啶(PI)溶液(50ug/ml)
产品简介:
碘化丙啶(PI)是一种核酸荧光染料,它不能透过完整的细胞膜,但能够透过死细胞和凋亡中晚期细胞的细胞膜而使细胞核染色。因此,PI 作为荧光探针常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis) 的检测。在流式细胞分析中,PI 常与其他染料如Calcein-AM、Hoechst 33258 或Hoechst 33342 联合使用,来区分凋亡早晚期细胞以及死细胞。此外,PI 也常作为多色荧光染色的复染剂使用。
产品描述:
本产品为液体(1X),已经过 0.1μm过滤,不含细菌、支原体等。
规格:10mL/支
有效期: 12个月
储存条件:-20℃
运输条件:低温运输
使用说明
1. 用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测,常用于流式细胞仪分析;
2. 常被用来与 Calcein, AM、Hoechst 33258 或 Hoechst 33342 等一起使用,能同时对活细胞和死细胞染色。
操作步骤
操作步骤(仅供参考):
细胞样品的制备:
(1) 贴壁细胞:
① 收集上述细胞悬液到离心管内。
② 4℃离心,使细胞沉到管底。小心吸取上清并丢弃,可留大约 50ul 培养液,以免吸走细胞,
③ 加入约1ml 提前预冷的PBS,重悬细胞,并转移至 1.5ml 无菌离心管。
④ 4℃离心,使细胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丢弃,可留大约 50ulPBS,以免吸走细胞。
⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。
(2) 悬浮细胞:
① 4℃离心,使细胞沉到管底。
② 小心吸取上清并丢弃,可留大约 50ul 培养液,以免吸走细胞。
③ 加入约1ml提前预冷的 PBS, 重悬细胞,并转移至 1.5ml 无菌离心管。
④ 4℃离心,使细胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丢弃,可留大约 50ul PBS, 以免吸走细胞。
⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。
细胞的固定:加入1ml冰浴预冷70%乙醇中,轻轻吹打混匀,4℃条件下
固定2h或更长时间。4C固定 12~24h 可能效果更佳。
(3)细胞的清洗:
① 4℃离心,使细胞沉到管底。
② 小心吸取上清并丢弃,可留大约 50 ul 溶液,以免吸走细胞
③ 加入约1ml 提前预冷的 PBS,重悬细胞,并转移至1.5ml 无菌离心管。
④ 4℃离心,使细胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丢弃,可留大约 50ul PBS,以免吸走细胞。
(4)PI染色:在每个待检细胞样品中加入 500ul 配制好的PI染色工作液,轻轻重悬细胞沉淀,置于37℃避光水浴 30min.
(5)检测与分析:用流式细胞仪在激发波长 488nm 波长处检测红色荧光,同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞 DNA或 RNA 含量分析和光散射分析。
注意事项
1、荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽快检测。
2、为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
3、在为了获得细胞沉淀的离心的过程中,对于特殊细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当提高离心力或延长离心时间。
4、如果用于组织的细胞周期与细胞调亡检测,则必须把组织消化后,制备成单细胞悬液,才可以进行检测,
5、可溶于水或 DMSO。本品用 DMSO 溶解,因 DMSO的熔点是 18.5℃,使用前请放置到室温充分溶解。
购买说明
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