产品描述

信使核糖核酸（mRNA）在细胞质中启动蛋白质翻译，不需要进入细胞核，可实现比DNA转染更快的蛋白表达，且避免基因整合风险。

EZ Trans mRNA转染试剂是一种结合了阳离子聚合物和脂质体优点的转染试剂，协同促进转染复合物进入细胞，随后在胞质中释放，能够在多种细胞类型中实现高效、低毒的转染效果。

订购信息

运输与保存

蓝冰运输。4℃保存，有效期 6 个月；-30℃至-10℃保存，有效期12个月。注：避免反复冻融。

使用方法（以 24 孔板为例，其他培养皿中转染请参考表 1）

1． 接种细胞

对于贴壁细胞：转染前一天，将细胞按照每孔1-2x10^5个细胞的量进行铺板，使其在转染时密度为60%-80% 为佳。

对于悬浮细胞：转染当天，配制转染试剂-核酸复合物之前，用PBS清洗细胞1-2次，用250 μL Opti-MEM I 减血清培养基 (无血清) 重悬细胞，在24孔板中进行细胞铺板，细胞密度为60-80%。

2． 准备转染试剂-mRNA复合物

(1)  对于每孔细胞，将 0.5 μg待转染mRNA加入到1.5mL离心管中，加入2 μL转染试剂与mRNA 混合，室温孵育3 min。

(2)  往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I减血清培养基(无血清)，轻轻混匀，在室温下静置30 min，形成转染试剂-核酸复合物。

(3)  30 min后，往上述复合物中加入250 μL Opti-MEM I减血清培养基(无血清)，轻轻混匀。

3． 转染细胞

(1)  细胞用PBS清洗1-2次，将上述350µL转染试剂-mRNA复合物加入每孔细胞。

(2)  在 37℃，5% CO2 培养箱培养12 h，无需更换新的培养液，之后即可检测转染效果。若需更长时间转染，可在转染12 h后补充500 μL培养基 (含血清)，12-36 h后再进行检测。

注意事项

1.    本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2.    mRNA质量：请务必使用高纯度、无菌、无污染、无内毒素的优质mRNA。可以通过对mRNA进行加帽(相比于Cap0结构，带有Cap1 结构的mRNA对于哺乳动物系统更适合)，使用N1-甲基-假尿苷修饰和添加poly(A)尾，以增强mRNA的稳定性和寿命。

3.    整个实验过程使用无RNA酶和无热原性的材料，如离心管、枪头、缓冲液。

4.    细胞条件：细胞状态会极大影响转染效率，待转染细胞应处于良好生长状态，建议使用生长处于指数期、存活率大于90% 的细胞进行转染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。

5.    细胞培养液要求：EZ Trans mRNA转染试剂转染实验要求采用无血清转染体系(推荐使用Opti-MEM减血清培养基)，因为血清会影响复合物的形成及mRNA转染效率。

6.    由于某些特殊培养基中的成分可能会抑制阳离子聚合物介导的转染，因此建议测试这些培养基与本产品的相容性，以确保最佳转染效果。

7.    试剂用量的优化：RNA 浓度和转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，初次使用应优化mRNA 浓度和转染试剂用量以得到最大的转染效率。通常情况下，24孔板的推荐mRNA用量为0.2-1 μg，转染试剂推荐用量为2-4 μL。建议初次使用时，可在推荐范围内进行不同用量的预实验，以优化转染效果。

表 1：不同培养体积对应的待转mRNA、 EZ Trans、稀释液用量

注：该表使用量仅供参考，具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。a: 稀释转染试剂-mRNA复合物所需培养基的量；b: 加入转染试剂-mRNA复合物的培养基的量。

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本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。