trialtusbioscience：CRISPR-Cas9 Protein  货号：40-1320/40-1325

TriAltus Bioscience诞生于伯明翰阿拉巴马大学的创新研究，是一家致力于将开创性的clm(CL7/Im7)纯化技术商业化的衍生公司。Dmitry Vassylyev博士及其团队开发的这一专有系统重新定义了行业中酶纯度和活性的标准。

TriAltus的高纯度Cas9蛋白用于CRISPR技术的基因组编辑。重组化脓性链球菌Cas9 (wt)蛋白在大肠杆菌具有两个(N-末端和C-末端)核定位信号(NLS)和CL7标签，其在纯化过程中用切割前蛋白酶除去。Cas9蛋白与指导RNA (gRNA)结合，形成稳定的核糖核蛋白(RNP)复合物，使细胞中的基因组编辑高效而精确。

规范

纯洁| ~99% (SDS-PAGE凝胶分析)

酶源|化脓性链球菌Cas9表达于大肠杆菌用两个(N-末端和C-末端)核定位信号(NLS)，并用我们的CL7标签技术纯化。

内毒素|<0.3 EU/ug by rFC method

储存；储备/运输专注度|5毫克/毫升

存储缓冲|10 mM Tris-Cl pH 8.0，250 mM NaCl，50%甘油

推荐的储存条件|-80摄氏度

过期|按照指示储存时，自收到之日起6个月。避免重复冷冻/解冻循环。

图一。与商业获得的Cas9相比，CL7/Im7纯化的Cas9的切割活性。在1.2%琼脂糖/TAE凝胶上解析反应，然后用SYBR GOLD染色。从商业来源(CO)获得的Cas9或CL7/Im7纯化的Cas9 (Im7)与等摩尔(+)，或无(-)，退火的sgRNA复合。将不同浓度的复合物与1.1 kb的目标DNA片段在37℃下孵育15分钟。sgRNA识别目标DNA中间的序列，切割后产生约550 bp的片段。Im7纯化的Cas9显示出与商业Cas9相当的活性。

图二。CL7/Im7纯化的Cas9和4步纯化的Cas9在细胞中的活性相同。

(一)在用Lonza nucleofector 2b电穿孔和使用来自4步纯化(顶行)或1步纯化方案(底行)的Cas9WT改变RNP浓度后，人镰状细胞iPSCs(诱导多能干细胞)的相差显微镜检查。

(二)中所示的电穿孔实验的存活率和修饰表(一)。用两种方案纯化的Cas9制备的RNP用一种sgRNA进行测试，该sgRNA被设计用来纠正导致镰状细胞病的血红蛋白中的1 BP错误。通过数字PCR评估修饰率。这些蛋白质产生了相同的生存力和修饰率，表明在细胞中具有同等的效率。这些测试是由UAB阿拉巴马大学的蒂姆·汤斯和丁磊完成的。

SKU

100克:40-1320

500克:40-1325

上海牧荣生物科技有限公司

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