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IL-23 STAT3 荧光素酶报告基因HEK293

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武汉艾美捷科技有限公司

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详细信息

IL-23响应型STAT3荧光素酶报告基因HEK293细胞系是一种工程化的HEK293细胞系,表达受STAT3响应元件控制的萤火虫荧光素酶,以及人类IL-23受体复合体(IL12Rβ1 NM_005535.3 和 IL23R NM_144701.3)。利用这一细胞系,可以通过测量荧光素酶活性来监测IL-23活性。


IL-23响应型STAT3荧光素酶报告基因HEK293细胞系的功能已通过使用重组人类白细胞介素23(人类IL-23;p19 + p40)的剂量反应实验、使用抗IL-23抗体乌司他木单抗和古塞库单抗的抑制实验,以及Janus激酶抑制剂鲁索利替尼的实验进行了验证。


背景

IL-23是由p40和p19组成的异源二聚体复合物,是一种由激活的巨噬细胞和树突状细胞产生的促炎细胞因子。这种细胞因子通过促进辅助T细胞产生干扰素-γ(IFN-γ)和支持分泌IL-17的CD4+ T细胞的增殖,在免疫反应中发挥着至关重要的作用。由于它涉及多种自身免疫疾病,包括炎症性肠病(IBD)、结肠炎、银屑病和关节炎,目前正在大力开发能够拮抗IL-23信号通路的试剂。


作为BPS Bioscience在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐BPS Bioscience热销产品IL-23 响应型 STAT3 荧光素酶报告基因 HEK293 细胞系产品仅用于科研,不可用于临床诊断。

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IL-23 响应型 STAT3 荧光素酶报告基因 HEK293 细胞系

BPS-82591查看


应用

筛选和表征抗IL-23抗体


细胞解冻

1. 在37°C水浴中摇晃装有冷冻细胞的小瓶大约60秒。细胞解冻后(可能比60秒稍快或稍慢),迅速将小瓶的全部内容转移到含有10 ml预热的解冻培养基1的试管中。

注意:在37°C水浴中放置细胞过久将导致活性迅速丧失。

2. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟,去除培养基并将细胞在5 ml预热的解冻培养基1中重悬。

3. 将重悬的细胞转移到T25培养瓶中,并在37°C、5% CO2培养箱中培养。

4. 培养24小时后,检查细胞附着和活性。更换培养基为新鲜的解冻培养基1,并继续在37°C、5% CO2培养箱中培养,直到细胞准备好分裂。

5. 细胞应在w全融合前传代。在s次传代及后续传代中,使用生长培养基1U。


细胞传代

1. 抽去培养基,用无Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗细胞,并用0.05% y酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离,加入生长培养基1U并转移到试管中。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟,去除培养基并将细胞在生长培养基1U中重悬。

4. 按照推荐的亚培养比例1:5至1:8,每周一次或两次将细胞种入新的培养容器中。


细胞冷冻

1. 抽去培养基,用无Ca2+/Mg2+的PBS冲洗细胞,并用0.05% y酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离,加入生长培养基1U并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟,去除培养基并将细胞在4°C冷冻培养基(BPS Bioscience #79796)中重悬,细胞浓度为1~2 x 10^6个细胞/ml。

4. 将1 ml的细胞悬浮液分装到每个冷冻小瓶中。将小瓶放入保温容器中缓慢冷却,并在-80°C下保存过夜。

5. 次日将小瓶转移到液氮中长期保存。

注意:建议在早期传代时扩增细胞并至少冷冻10个小瓶以备将来使用。

IL-23 STAT3 荧光素酶报告基因HEK293

图. 通过流式细胞仪分析IL-23响应型STAT3荧光素酶报告基因HEK293细胞系中IL23R和IL12Rβ1的表达。

IL-23响应型STAT3荧光素酶报告基因HEK293细胞(绿色或粉红色)或对照STAT3荧光素酶报告基因HEK293细胞(蓝色)分别用人类IL12Rβ1 PE偶联抗体(右图;R&D系统 #FAB839P)和人类IL23R PE偶联抗体(左图;R&D系统 #FAB14001P)进行细胞内染色,并通过流式细胞仪分析。Y轴代表细胞数量百分比。X轴表示PE的强度。


文献参考:

Yang K., et al., 2021 Am J Clin Dermatol. 22(2): 173-192.


BPS Bioscience是一家通过ISO 9001:2015认证的生命科学领域的供应商,公司一直致力于开发药物研发领域的重组蛋白酶、蛋白酶活性/抑制剂筛选试剂盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年创立,从创立至今一直致力于提供药物研发领域的创新解决方案,以推动新的药物发现。公司主要关注的领域包括免疫疗法、表观遗传学、CRISPR、细胞信号转导等,主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白甲基化转移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 


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