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DNA Ladder检测试剂盒
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南京赛泓瑞生物科技有限公司专注于是一家专注于研发和生产原代细胞、肿瘤细胞及细胞培养相关试剂产品的生物高科技企业，可以为各类研究机构提供符合标准规范的原代细胞、肿瘤细胞及相关实验技术服务；
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公司设立质量管理部，建立了高标准的质检系统，产品从原料、半成品、成品入库到销售之前，每一个环节都有严格的质检标准，并以标准的生产工艺，保证产品质量的稳定性。
详细信息
凯基细胞凋亡DNA Ladder检测试剂盒
（ApotosisDNA Ladder Detection Kit）
Cat number：KGA For Research Use Only
Store at-20℃ for one year
Expire date：
一、试剂盒说明
细胞核染色质DNA断裂是细胞凋亡的标志特征。在细胞发生凋亡时，核酸内切酶被激活，选择性降解染色质DNA，形成50-300 kb的大片段，并进而在核小体连接处断裂，形成180-200 bp或其整倍数的DNA片段，这些DNA片段可从细胞中提取出来，通过琼脂糖凝胶电泳，溴化乙啶染色呈现为梯状条带（DNA Ladder），并据此判断细胞凋亡产生。凯基细胞凋亡DNA Ladder检测试剂盒提供了一种简便、快速地提取染色质DNA的方法，并增加对小片段DNA的回收，从而增强了检测的敏感性。
本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不*用于检测组织样本）。
二、试剂盒组份
| 组份 | Cat:KGA111（20 assays） | Cat:KGA112（50 assays） | Cat:KGA113（100 assays） | 储存条件 |
| Lysis Buffer | 4 mL | 10 mL | 20 mL | 4℃ |
| Solution A | 400μL | 1.0 mL | 2.0 mL | -4℃ |
| Enzyme A | 400μL | 1.0 mL | 2.0 mL | -20℃ |
| Enzyme B | 400μL | 1.0 mL | 2.0 mL | -20℃ |
| Precipitant | 3.0 mL | 6.5 mL | 13.0 mL | 4℃ |
| Loading Buffer | 80μL | 0.2 mL | 0.4 mL | 4℃ |
三、试剂盒以外自备仪器和试剂
高速离心机、微量移液器、涡旋振荡器、凝胶电泳仪、37-55℃水浴
1.5m L Microtube、PBS、胰酶消化液、冰乙醇、TE Buffer，琼脂糖，TBE、溴化乙啶、DNA Ladder Marker
四、使用注意事项
1. DNA Ladder出现在细胞凋亡晚期，观察细胞形态已发生皱缩出芽，染色质*凝聚，细胞核已固缩断裂的凋亡晚期形态，建议该种形态的凋亡细胞比例在30%以上时进行DNA Ladder检测或*行Tunel检测，
2. DNA Ladder出现在一个较短的时间段，在凋亡早期取样，则无DNA降解的条, 带，而在凋亡末期取样则产生与细胞坏死相似的DNA弥散条芾。因此取样时间需根椐不同种类的细胞和诱导剂而摸索确定。
3. 贴壁细胞不用胰酶消化而用细胞刮收集。
4. 某些细胞不产生这种核小体间的DNA断裂，而是产生50-300kb的大片段断裂。
五、操作方法
1． 离心收集105~106细胞（1500×g，离心5min）于1.5mL微量离心管中；
2． 用PBS洗涤细胞二次（1500×g，离心5min），弃上清；
3． 沉淀的细胞中加入100μL Lysis Buffer，涡旋振荡器上剧烈混合10秒， 1000×g，离心5min后移上清于另一1.5mL微量离心管中；
4． 沉淀再加入100μL Lysis Buffer重复上步，合并两次的上清液；
5． 在上述合并的上清液中加入20μL Solution A，再加入20μL Enzyme A， 55℃反应1小时；
6． 加入20μL Enzyme B,37℃孵育1小时；
7． 加入130μL Precipitant和950μL冰乙醇, 混匀，置—20℃,1小时以上或过夜；
8． 4℃，12，000-14，000 rpm离心15-30min，小心地弃去上清，收集沉淀的DNA；
9． 加入0.5mL 70%的冷乙醇，洗DNA沉淀，再12，000-14，000 rpm离心20min；
10．弃上清，DNA沉淀于室温干燥10 min后，加入10-15μL TE Buffer，充分搅拌溶解DNA；
11．取上述10-15μL样品加入2-3μL Loading Buffer， 1.5%琼脂糖凝胶电泳（凝胶和电泳缓冲液TBE均加入0.5μg/mL的溴化乙啶）；
12．5V/cm电泳1小时，紫外灯下观察并拍照。
