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KGA106 Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒
- 型号
- KGA106
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南京赛泓瑞生物科技有限公司专注于是一家专注于研发和生产原代细胞、肿瘤细胞及细胞培养相关试剂产品的生物高科技企业，可以为各类研究机构提供符合标准规范的原代细胞、肿瘤细胞及相关实验技术服务；
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Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒（膜联蛋白A5-绿色荧光素/碘化丙啶细胞凋亡检测试剂盒）（胎盘抗凝蛋白-绿色荧光素/碘化丙啶细胞凋亡检测试剂盒
| Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒 （Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit） Cat number：KGA For Research Use Only Store at4℃ for one year Expire date：  一、 试剂盒说明 在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不*用于检测组织样本）。 二、 试剂盒组份
三、试剂盒以外自备仪器和试剂 流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器 1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、不含EDTA的胰酶消化液 四、 使用注意事项 1． 微量试剂取用前请离心集液。 2． Annexin V-FITC，Propidium Iodide （PI）避光保存及使用。 3． Propidium Iodide （PI）有毒，操作时要戴手套。 4． 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不*用于检测组织样本。 5． *使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。 6． 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。 7． 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。 五、操作方法 1． 悬浮细胞离心（2000rpm离心5min）收集；贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集（注：胰酶消化时间不易过长，否则容易引起假阳性）； 2． 用PBS洗涤细胞二次（2000rpm离心5min）收集1~5×105细胞； 3． 加入500μL的Binding Buffer悬浮细胞； 4． 加入5μL Annexin V-FITC混匀后，加入5 μL Propidium Iodide，混匀； 5． 室温、避光、反应5～15min； 6． 请在1 hour内，进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。 A．荧光显微镜观察 1． 滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞； 2． 对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡； （1） 将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组； （2） 用PBS洗涤细胞两次； （3） 在500μL 的Binding Buffer中加入5μL Annexin V-FITC， 5 μL Propidium Iodide，混匀； （4） 将上述溶液滴加于盖玻片表面，使盖玻片表面均匀覆盖； （5） 避光、室温反应5 min。 3． 将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下、双色滤光片（FITC和罗丹明）观察 Annexin V-FITC荧光信号呈绿色，PI荧光信号呈红色。 B． 流式细胞仪分析 用流式细胞仪检测，激发波长Ex=488 nm; 发射波长Em=530 nm。 Annexin V-FITC的绿色荧光通过FITC通道（FL1）检测；PI红色荧光通过PI通道（FL2或FL3）检测，建议使用FL3。 荧光补偿调节：使用未经凋亡诱导处理的正常细胞，作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。 六、实验范例 用凋亡诱导剂诱导P388细胞凋亡，在37oC，5%CO2培养箱培养4～6h后，参照说明书的操作方法进行检测，经流式细胞仪检测结果见下图。   对照 诱导剂处理 |
