免疫组化试剂盒使用说明书        

（通用型）

工作原理

SABC（Strept Avidin-Biotin Complex）是专为免疫组化等免疫反应而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量47000。同亲和素一样，对生物素分子有*的亲和力。链霉亲和素等电点接近中性,IP=6.0-6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低，因而基于链霉亲和素的免疫组化方法背景往往很低。根据研究，SABC 大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。先用生物素标记的二抗特异性的结合一抗，然后通过二抗聚合大量的链酶亲和素—过氧化物酶复合物，形成链霉素亲霉素酶复合体（SABC）。这样也保证了SABC 具有很高的敏感性。SABC 兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。

辣根过氧化物酶（HRP）由于在辣根中的含量很高，故命名。它的分子量在40000左右，在过氧化氢存在时能催化苯酚、苯胺等聚合，它不会遮盖抗原的结合部位，具有较高活性及特异性，生成的产物不易扩散，可作用于多种底物，产生不同颜色且HRP穿透力强，易进入细胞内。DAB在 H₂O₂存在的情况下，可以作为HRP的电子供体，产生褐色的不溶颗粒，可作为显色的试剂。

试剂盒组成（*切片数50～100pcs）

操作步骤

1.      切片防脱片剂处理:可选择APES 或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60 ℃30-60 分以，使切片紧密粘附。

2.      防脱片剂处理后的切片在二甲苯中脱蜡，然后逐级降浓度酒精入水，每次3-5 分钟；

*I（变为不透明）                 1－2分钟
*II                              1－2分钟
95% 酒精                                1－2分钟
80% 酒精                                1－2分钟   
自来水洗                                 片刻   

3.      0.01mol/L pH7.4 PBS洗涤3次，每次5 分钟 ；

4.      3% H ₂ O ₂ 室温孵育 5-10 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗涤2-3次，每次5 分钟；

5.      0.01mol/L pH6.0柠檬酸缓冲液复性20分钟，冷却至室温。0.01 mol/L  pH7.4的PBS洗涤3次，每次5 分钟 ；

6.      加封闭液（5%BSA）50ul/片，于湿盒中室温感作30分钟，然后甩去多余的封闭液，不洗涤；

7.      滴加一抗到切片上37℃孵育1小时左右或者4℃过夜， 然后0.01 mol/LpH7.4的PBS洗涤3次，每次5 分钟 ；

8.      滴加二抗，覆盖切片，置湿盒中37℃感作30分钟左右（以锡纸避光即可），取出后洗涤（方法同4）。

9.      DAB显色；

10.  苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。显微镜观察。

保存方法   2-8℃保存，注意避免冷冻。

有 效 期   一年                                 

生产日期   见封口