Matrigel 使用指南及常见疑问

Matrigel 收货注意事项，请检查：

1.       盒子内是否有干冰

2.       基质胶是否呈固态，胶面是否水平

3.       基质胶颜色是否在正常范围（黄色-粉红-深红）

产品特性 ：

Martrigel基质会有色差变化（淡黄色到深红色），是由于酚红和碳酸氢盐与CO2的作用引起的，但是与5%CO2平衡后色差即会减少。

基质胶冻融操作 ：

收货后，若不立刻使用基质胶，应马上将仍然是冷冻固态的基质胶放进-20℃冰箱保存。使用前须先将基质胶冻融。

冻融：

将基质胶埋于铺满碎冰的冰盒中，然后将整冰盒放入4℃冰箱stay overnight溶解。（普通浓度的基质胶，溶解时间1-2天；高浓度基质胶溶解时间 3-7天）。

分装：

溶解后的须分装保存，以避免反复冻融。液态基质胶，会在10℃以上快速成胶（特别是高浓度基质胶），因此，分装时，接触到基质胶的耗材必须预冷（如移液管、吸头、EP管等），并且整个实验必须无菌、冰上操作。（高浓度的基质胶比较粘稠，用移液器不好吸取，可以使用去掉针头的预冷注射器吸取。）

保存：

分装后的基质胶在冰上应仍然呈现液态，此时将基质胶放进-20℃保存即可。进行实验时，取出分装好的小管，4℃冻融。若分装好后基质胶已经凝固，说明分装操作不能很好地保持低温，导致基质胶已经成胶，不适宜使用。

普通浓度基质胶操作：

包被与成胶

细胞可在0.5mm厚度的基质胶表面生长，可以在1mm厚度的三维基质内生长。过度稀释的基质胶会形成非胶质的蛋白层，可以用于细胞贴壁，但不能用于细胞的研究分化。为保证基质胶的成胶性能与稳定，稀释浓度不应低于1：3，可用预冷无血清培养基稀释，成胶后立即使用。

薄胶成胶方法：

1．冻融后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状。

2．  将需要使用的培养板置于冰上，加入浓度为50ul/cm2生长面积的基质胶。

3．  在37℃放置30min，即可使用。

厚胶成胶方法

1.      冻融后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状。

2.      将需要使用的培养板置于冰上，将培养的细胞与基质胶混合，用移液枪头使其悬浮于基质中。加入浓度为150-200 ul/cm2生长面积的基质胶。

在37℃放置30min，可成胶。也可以加入细胞培养的基质，也可使细胞直接生长在胶表面。

薄层包被方法：

1.     冻融后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状。

2.     根据需要，采用无血清培养基稀释基质胶，根据实验需要确定*包被浓度。

3.     将稀释的基质胶包被与所需的培养器皿中，包被量至少覆盖整个器皿的生长表面，室温下孵育1小时。

去除未结合的基质胶，用无血清培养基轻轻地冲洗。备注：普通浓度的基质胶，建议稀释浓度不低于3mg/ml；我们不能保证稀释浓度低于3mg/ml能够成胶。

普通浓度的基质胶，不建议用于成瘤实验。

BD细胞回收剂354253，离散酶354235，冰浴7小时后回收得到细胞。

肿瘤侵袭实验：

操作过程

1.     冻融（对于预包被的24孔培养小室请参考1.1-1.3操作，对于自己包被好待用的24孔小室，请直接从步骤2开始）

1.1  从-20℃冰箱中取出产品，使其自然升温到室温。

1.2  取出培养板在细胞小室内加入500μL 37℃预热的PBS，37℃无CO2环境下孵育2小时。

1.3  解冻后，小心去除小室内的培养基，避免破坏Matrigel基质膜。

2.     染色剂后标记法

细胞通过侵袭消化基质膜后迁移到下小室，采用荧光标记定量细胞。细胞的侵袭能力用终点计算法计算得到。对于采用实时动力曲线的计算，推荐使用前标记法。

2.1 如步骤1 准备培养板。

2.2 胰酶消化细胞单层后制得细胞悬液，溶于无血清DMEM培养基，推荐浓度为5×10⁴cells/mL。

2.3 上小室中加入500μL细胞悬液（2×10⁴ cells）。

2.4 通过进样口在下小室中加入750μL诱导剂。

2.5 在37℃，5% CO2 条件下孵育培养板和对照板20-22小时（由细胞类型决定）。

2.6 孵育后，小心去除上小室中的培养基及基质胶，避免破坏小室的膜及膜底侵袭转移的细胞。

2.7 将培养小室转移到另一块24孔板中，结晶紫或钙黄绿素染色。计算。