细胞凋亡在许多细胞系统中是一种被充分证实的现象它在胚胎发生期间的组织和器官发育以及调节成体组织的细胞更新中起关键作用。在免疫系统中，凋亡提供了胸腺自身反应性T细胞2、生发中心低反应性B淋巴细胞3以及易受细胞毒性T淋巴细胞和自然杀伤细胞攻击的靶细胞的缺失机制。1,4在结构上，细胞凋亡的特征是染色质凝聚、细胞大小减小和核酸内切酶将DNA切割成核小体大小的片段。1,4,5除了这些细胞形态的变化发生在细胞凋亡过程中，细胞膜磷脂不对称性的丧失是一个重要的事件，磷脂酰丝氨酸(PS)从磷脂双分子层的内小叶转移到细胞表面虽然PS外化的功能尚不清楚，但它可能是吞噬细胞识别的“信号”，吞噬细胞通过吞噬凋亡细胞作出反应。

在失去质膜完整性之前。暴露于细胞表面的PS为检测细胞凋亡提供了一种简单的方法。膜联蛋白V (Mr 36-kDa)是钙依赖性磷脂结合蛋白膜联蛋白家族的一员，对含ps的磷脂双分子层具有高亲和力。当PS暴露在细胞膜的细胞外表面时，膜联蛋白V以大约7纳米的亲和力结合膜联蛋白V的荧光染料偶联物可用于监测细胞膜磷脂不对称性的变化10-13，从而提供了一种方便的工具。

由于PS外化发生的时间早于与凋亡相关的细胞核变化，因此ApoScreen Annexin V凋亡试剂盒可用于比基于dna的检测更早地检测凋亡途径中的细胞标记膜联蛋白V也可用于分析膜的变化，行星和红细胞的不对称单个ApoScreen标记的膜联蛋白V试剂见产品号10040-02和10040-09。

试验原理

ApoScreen Annexin V凋亡试剂盒采用r -植物红蛋白标记的Annexin V (Annexin V- r - pe)7-AAD评估细胞凋亡亚群。在细胞凋亡的早期阶段，细胞开始在外细胞膜上显示PS，通过膜联蛋白V-R-PE染色细胞很容易检测到PS。随着在细胞凋亡的后期，质膜变得越来越通透，7-AAD可以很容易地穿过细胞膜并与细胞DNA结合，为识别那些通过坏死等机制失去膜完整性的细胞提供了一种手段。当细胞被膜联蛋白V-R-PE和7-AAD双重染色时，可以观察到三种不同的细胞群(图2):(i)活细胞不被膜联蛋白VR-PE或7-AAD染色;(ii)两种试剂染色的坏死细胞;(iii)仅膜联蛋白V-R-PE染色的凋亡细胞。分析可以在任何配备单个激光的流式细胞仪上进行，激发波长为488nm。

设备组件

1ml annexin V-R-PE:保存在2-8°C。按指示使用;无需预稀释。

1 mL 7-AAD(100次):保存在2-8°C。按指示使用;无需预稀释。避免皮肤接触并妥善处理。

7 × 1.5 mL 10X结合缓冲液:保存在2-8°C。使用前用9份dH20稀释1份10X缓冲液。