R&D systems公司 ELISA 酶联吸附免疫法Q&A

问：我的Quantikine试剂盒中的RD1测试稀释剂看上去有沉淀物，可以用吗？

答：有些RD1测试稀释剂的确有不同程度的沉淀物。在这种情况下，我们在实验步骤手册中已做纪录。

问：标准曲线为什么要采用4-pl拟合？

答：R&D Systems在研发和质控我们绝大多数的Quantikine ELISA试剂盒时，采用4-相参数的曲线拟合（又名为4-pl或sigmoidal曲线拟合）。一般来说，它比log-log和直线有更好的曲线拟合。 如果数据分析不可用4-pl的话，log-log是下一个的选择。

问：试验步骤中说要用500 rpm，我的摇床达不到。这个速度是正确的吗？

答：500 rpm使用的是0.12英寸的震荡轨道。如果你的震荡器用更大的震荡轨道，500 rpm的确是过快了。在这种情况下，你应根据R&D Systems的建议重新调整震荡速度。你可拿一个多余的96孔微孔板，加入洗液，洗液的量与实验时孔中的溶液量一致；封板后，调整震荡器的速度，直到液 体在孔的上部剧烈旋转但不溅到封膜上或产生泡沫为止。

问：我有太大变异系数（CV）的问题，是怎么回事？

答：zui大但不是*的两个原因，可能是移液误差和清洗方式。

问：Quantikine ELISA试剂为什么需要做稀释？

答：主要有两个原因：一，在绝大多数的样本中细胞因子的含量非常高，如不经稀释，读数将高于标准曲线；二，也是zui普遍的原因我们建议做稀释，是将样本中的干扰或基质效应稀释掉。

问：我是否可以在任何时间过长步骤停止Quantikine试验、延长温育时间、或提高温育的温度？

答：R&D System不建议对任何Quantikine ELISA延长温育时间。而且，当实验步骤改变了，我们无法保证Quantikine ELISA的实验结果。R&D System做“整个试剂盒的质量控制”，就是说我们无法支持改变过的实验步骤，因为它们未经质量控制。延长温育时间、或提高温育温度以缩短温育时间会提 高实验的本底（又名空白或零标准）。这样一来，样本和标准中的低量细胞因子会测不到，因为增高了的本底信号将从所有孔中的数值中差减。

问：我用了DuoSet ELISA开发系统，但几乎就没有颜色产生。那些步骤可能出了问题？

答：很多方面都会影响到颜色的产生。比如：
1) BSA的干扰。选择不含脂肪酸的ELIS*别的BSA很重要，可以降低球蛋白对实验的干扰。R&D Systems建议使用Serological Proteins的BSA（目录#82-045）。
2) 非室温下的试剂在使用时会抑制信号；如果室温过低，信号也会被抑制。
3) 如果使用了未表明为“高结合性ELISA”的微孔板，捕获抗体同微孔板的结合就不牢固，从而导致测试的颜色产生过低。
4) 任何试剂，如果配制出错、储藏不当、或已过期，都将出现这一问题。
5) 读板时使用的波长同低物的波长不一致。

问：我是否可以使用你们的抗体配对ELISA中的抗体，但用另一家公司的蛋白为标准？

答：若使用一家公司的抗体而用另一家公司的标准的带来问题是它们会有不同的免疫活性（或不同的抗体与重组蛋白的结合力）。这种现象的出现是因为 作为标准的重组蛋白同作为抗体免疫原的重组蛋白在蛋白序列或折叠中会有所不同，如果蛋白序列或折叠的不同发生在抗体结合部位，就会引起抗体对重组蛋白标准 的不识别或识别很差。