R&D systems公司 ELISA 酶联吸附免疫法Q&A

问：R&D Systems的Quantikine试剂盒是否可用于组织匀浆（或其它未经检验的）样本？

答：很遗憾，R&D Systems尚未采用组织匀浆作为样本对Quantikine系列的试剂盒做效果验证。如果要决定试剂盒是否可用于未经检定的样本，实验者先做一个 “掺入和回收预试验”。简单来说，实验者将样本分为两份：一份中掺入一定量的试剂标准，然后做一稀释系列（一般稀释到1:16），再将掺入过的一份同未掺 入的一份相比。采用以下的公式来计算回收率（%）：测试值（pg /毫升）/ 期待值（pg /毫升）x 100% = % 回收率。一般来说，回收率在80-120%可认为是可接受的。但是，可接受范围应由每一实验室自行决定。这种方法可用于检定未被R&D Systems检定的任何样本。我们还有更加详细的“掺入和回收”的实验步骤，可向我们的技术服务部索取。我们也可进一步查阅文献看一看是否有其他试验人 员用我们的产品做过不同的样本，或不同的属种。

问：加入稀释剂是否会将样本进一步稀释？

答：因为稀释剂是加入到所有的孔中，标准和被测样本都被同样稀释，所以样本的浓度可从标准曲线读出，而不需作稀释调整。

问：我是否可将标准曲线的两端延伸？

答：在任何情况下，我们都不支持超出确定范围的实验结果。在我们确定的测试范围，我们保证实验结果的可重复性。

问：为什么不将测试范围延伸到所述的灵敏度？

答：灵敏度是统计中大于零的可测到的zui低值。它是通过本底信号和试验的可变性计算出来的。灵敏度是将20个零复制物的中值加两个标准差从标准曲线换算成分析物的浓度。而zui低标准是我们可以放心的、仍可与标准曲线成直线相关的zui低点，因而是可定量的。

问：Quantikine试剂盒中的试剂是否可互换？

答：如果试剂盒(RD1-, RD5-, RD6-)中的稀释剂有相同的组件号和批量号，它们可以互换。R&D Systems做“整个试剂盒的质量控制”，就是说，我们不支持不同批号之间的替代。在任何情况下，微孔板和共轭物都不可互换。

问：Quantikine试剂盒中的洗液是否可互换？

答：如果组件号相同，洗液在相同类型的试剂盒之间（普通试剂盒之间，或高灵敏度试剂盒之间）是可以互换的。但是，普通Quantikine试剂 盒中的洗液不能用于高灵敏度的试剂盒，在普通Quantikine试剂盒中的洗液含有磷酸，会干扰高灵敏度Quantikine试剂盒中由NADPH驱动 的信号扩增。

问：在某些实验中为什么必须使用聚丙烯（polypropylene）的试管做标准稀释？

答：有些细胞分子会粘到玻璃或聚苯乙烯（polystyrene），但不粘聚丙烯。

问：在Quantkine试剂盒中没有足够的RD5校正物来稀释我的细胞上清液，我该怎么办？

答：你可用细胞培养液来做起始的稀释，直接移液到微孔板的zui终的1:10稀释可使用校正物来稀释。