基本信息

细胞名称 : HEP-53.4 小鼠肝癌细胞

细胞别名 : HEP-53.4 ; 53.4 ; 小鼠肝癌细胞

细胞来源 : 德国

细胞鉴定 : STR鉴定已通过

细胞形态 : 上皮样细胞，贴壁生长

培 养 基 : DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)(BasMed-AW-013)+FBS 10% + P/S1%

培养条件 : 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%

冻存条件 : 无血清冻存液，液氮储存

细胞背景 : 来源于 C57BL/6J小鼠的原发性肝细胞癌，这些小鼠肝细胞忠实地代表了肝细胞癌，并为研究这种类型的肝癌提供了有价值的模型，同义词HEP-53.4和53.4，它们便于识别和交叉引用，肝细胞癌是一个重大的健康问题，这些细胞能够对其分子通路、细胞相互作用和治疗策略进行精确研究，这些细胞起源于Mus musculus(小鼠)，为理解和开发肝细胞癌的治疗方法提供了相关的模型系统。

细胞用途 : 仅供科研使用

细胞货期 : 现货，1周左右

注意事项

1. 常规消化收集细胞离心。

2. 离心后去掉离心管内上清，加入1ml左右重悬细胞混匀，建议轻轻晃动或者轻轻吹打细胞， 放入培养箱消化细胞，再消化1min左右。

3. 消化好后，用移液枪轻轻吹打细胞悬液，使细胞团分散，迅速加入3-5ml含血清的培养基混匀以终止消化，离心去除

4. 加入5ml左右的细胞相应的培养基混匀，按比例接入培养瓶/皿中。

5. 显微镜下观察看细胞是否成均匀分散的单细胞，若有少量成团的小细胞团可不用重新消化，使之贴壁后待细胞生长稳定后再消散细胞。

常温发货

收到后T25瓶消毒再放置培养箱静置2-3小时后观察密度和状态拍照2-3张反馈给销售，密度达标就可以传代。前期传代比例1:2，等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成1个1ml冻存管，另外一瓶继续传代，反复冻存2-3只后才扩增做实验，以防突发情况引起断种。

干冰发货常规细胞发货冻存管2只，复苏1只，另外一只备用，第一个复苏不成功时严格按照厂家要求复苏第二个，均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知我们。

贴壁细胞

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％(w / v）0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化３.３.３.３.3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培养皿中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

4. 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

５. 运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。

悬浮细胞

HEP-53.4 小鼠肝癌细胞悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×10⁵~1×10⁶个/mL(不同细胞对密度要求不同）可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:4的比例进行。

运输形式低温：1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

常温: T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

生物安全

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

特别注意

该细胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培养基中生长良好，大部分的DMEM含有较高浓度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培养基培养细胞时需要提高CO2浓度（7%-10%）。