免疫印迹封闭液
时间：2010-06-17 阅读：2550
免疫印迹封闭液
在WB实验过程中，我们常常会提到封闭液的使用问题。我们会使用到封闭液的原因是因为在电泳转膜后，膜上其它没有结合蛋白质的空白位置需要用封闭液加以封闭，以避免非特异性结合。而Western Blotting的灵敏度，特异性在很大程度取决于封闭的好坏。过度的封闭导致抗原表位的遮蔽，从而降低检测灵敏度。不*封闭又会导致zui终背景增高或信噪比太低。zui常用的封闭液是脱脂奶粉，由于脱脂奶粉的成分比较复杂，里面微量的生物素或碱性磷酸酶就可能造成背景的污染而不太适合生物素－亲和素检测和碱性磷酸酶底物检测系统。另外，脱脂奶粉里的其它微量蛋白质有可能和待检测抗原有相似的抗体识别表位而造成交叉反应。还有的实验室也会用到BSA和CASEIN，这两种蛋白的溶液的封闭效果总体来说要比脱脂奶粉要好些，但是由于每个实验室人工配置溶液的不稳定因素，zui后的实验结果也存在了批间差异的问题。而KPL公司生产的Detector Block™就可以解决这个问题。下图是几种封闭液对比实验
从图中可以看出，脱脂奶粉封闭的效果是zui不好的，不仅灵敏度很低，而且背景比较高，BSA和Casein的封闭效果是差不多的，而，KPL公司的成品Detector Block™则背景比较低，而且灵敏度很高，这样的封闭液对于对灵敏度需求比较高的客户，以及实验结果需要清晰图片发文章的客户来说，是个不错的选择，另外，对了试剂盒生产厂家，购买成品的封闭液，有利于产品的稳定性的提高。