FICOLL PLUS 不连续密度梯度分离液使用说明
时间:2017-07-17 阅读:3125
FICOLL PLUS 不连续密度梯度分离液使用说明
技术文档编号:TBD0054SOP
ICLL PLUS不连续密度梯度分离液与梯度制备稀释液配比稀释后,可形成不同浓度(密度)梯度分离液,经低速(200-1000g)离心于数分至数十分钟内可达到满意的细胞分离效果。FICOLL PLUS 不连续密度梯度分离液不穿透细胞,无毒害,成功的用于动物细胞的分离。
试剂组成
名称:FICOLL PLUS 密度梯度原液 货号:P1114 100ml 梯度制备稀释液 100ml
【简介】
FICOLL PLUS 不连续密度梯度分离液与梯度制备稀释液配比稀释后,可形成不同浓度(密度)梯度分离液,经低速(200-1000g)离心于数分至数十分钟内可达到满意的细胞分离效果。FICOLL PLUS 不连续密度梯度分离液不穿透细胞,无毒害,成功的用于动物细胞的分离。
【操作方法】
- 不同浓度(密度)分离溶液的制备,使用梯度制备稀释液参考下表将原液稀释至所需浓度:
原液浓度(%) | 80 | 67 | 56 | 45 | 32 | 20 |
比重(g/ml) | 1.090 | 1.077 | 1.067 | 1.056 | 1.043 | 1.031 |
- 梯度分离层的制备:将梯度分离液由高密度至低密度逐层加入至离心管内,加入后应可见明显的梯度界面。
- 上样:根据不同目的细胞,加入不同体积血液样品或单细胞悬液(样本体积及细胞浓度不宜过高,否则影响细胞的分离及回收)。
- 离心:400-600g 离心 20-30min。根据不同样本个体差异及目的细胞特点,用户可适当调节离心力及离心时间(离心力zui大不超过 1000g)。
- 取样:当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时,可逐层去除分离溶液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于分离液层中,则需要逐层收集。收获含有分离液的细胞经 2 次洗涤后可供培养或检测用。
【注意事项】
- 实验全过程需在 20℃±2℃下进行,否则影响离心效果。
- 由于多层分离溶液之间密度差别不大,因此离心机加速、降速时要慢,要平稳。
- 试剂瓶盖需盖紧,防止蒸发和污染。
【储存条件及有效期】常温保存,有效期 2 年。本品易感染细菌,需无菌条件操作。无菌条件下操作,启封后置常温保存。如 4℃保存,本分离液易出现白色结晶,影响分离效果。
【特殊细胞分离试剂盒举例】
1. 富含 NK 活性大颗粒淋巴细胞(LGL)的纯化试剂盒(产品货号:NK2011H)
- 淋巴母细胞纯化和死细胞去除试剂盒(产品货号:P1114B)
- 【人不同血细胞的漂浮密度】
细胞 | 漂浮密度 | 细胞 | 漂浮密度 |
红细胞 | 1.090-1.110 | 淋巴细胞 | 1.052-1.077 |
粒细胞 |
| B 淋巴细胞 | 1.062-1.075 |
嗜酸性 | 1.090-1.095 | T 淋巴细胞 | 1.065-1.077 |
嗜中性 | 1.080-1.085 | 淋巴母细胞 | 1.065-1.077 |
单核细胞 | 1.050-1.066 | 自然杀伤细胞 | 1.050-1.070 |
血小板 | 1.030-1.060 |
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