人富含 NK 活性大颗粒淋巴细胞(LGL)的纯化试剂盒实验方法

【产品规格】

 100ml/Kit

 【产品组成】

 为方便广大用户使用，试剂内容如下：

【实验前准备】 

适用仪器：zui大离心力可达 1200g 的水平转子离心机

【检验方法】

全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。

1. 收集从外周血中分离的单个核细胞（人全血单个核细胞分离液，产品货号；LDS1075）： 1×10⁸ 个悬于 1ml 无血清培养基中。

2. 梯度分离溶液制备，使用使用梯度制备稀释液参考下表将原液稀释至所需浓度：

3. 梯度分离层的制备：将梯度分离液由高密度至低密度逐层加入至 10ml 离心管（试管）内，每层约 1.2-1.5ml 加入后应可见明显的梯度界面，同时标记 70%层上部界面及 73% 底部界面位置。

 4. 上样：将单个核细胞单细胞悬液 1ml 加至梯度界面上。

 5. 离心：400g，离心 20-25min。

 6. 取样：吸取 73%与 70%溶液界面及上下两层分离溶液（即步骤 3 标记位置之间的溶液），

细胞经洗涤后供后续试验。

注：样本量加大时请客户按选取对应耗材且按比例增加试剂用量，但应注意加入试剂及样本

后总体积不超过离心管总体积的 2/3。

【注意事项】

1. 实验全过程需在 20℃±2℃下进行，否则影响离心效果。

2. 由于多层分离溶液之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。

3. 试剂瓶盖需盖紧，防止蒸发和污染。

【储存条件及有效期】常温保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。