动物组织各种固定液及优缺点
时间:2017-05-10 阅读:4944
动物组织各种固定液及优缺点
编号 | 名字 | 配方 | 优缺点或备注 |
甲醛:从组织学的观点来说,甲醛是一种良好的固定剂,它有很多的优点:1. 组织收缩较少,损伤少,保存固有物质好.2. 固定均匀,穿透力强.3. 能使组织硬化,增进组织弹性,有利于切片.4. 能保存脂肪及脂类物质.5. 成本较低. 缺点:1. 杂质含量较多,如甲醇,可钝化酶类,影响反应.2. 含有微量甲酸,导致固定液酸变,影响染色.3. 可产生福尔马林色素,影响观察.4. 不能固定尿酸和糖类物质.5. 容易挥发,污染环境,可导致标本干涸.6. 可长期存在于固定过的组织上.有人做过实验,组织用甲醛固定后在流水中冲洗5小时后,仍留有相当多的甲醛与蛋白质相结合,临床活检不用.因此要特别指出的是,在其后的各种技术操作中,要特别注意到甲醛的存在,必须要想办法除去它,否则将会给各种染色造成影响,甚至导致失败。 | |||
1 | 10%缓冲福尔马林固定液 | 甲醛 100ml | 该固定液是当今流行的固定液,因它对组织固定较好,损伤较少,因对其后的各方面研究都较好,尤其是对免疫组化的染色。 |
2 | 10%福尔马林固定液 | 甲醛100 ml 自来水900ml | 这是一种zui简单的固定液,适合于边远地区携带的固定液,但由于它的单一性,因此,只要有条件的单位都不要求使用这种固定液。 |
3 | 10%福尔马林盐固定液 | 甲醛 100ml | 先将Nacl溶于水,再加入甲醛。这也是一种较为简单的固定液,但由于加入Nacl,它是一种重金属盐物质,加入了它可促进和改善染色,增加染色的强度 |
4 | Bouin氏固定液 | 苦味酸饱和水溶液 75ml | 该固定液中的冰醋酸,对胶原纤维等组织有膨胀作用。而甲醛对组织有收缩作用。两种试剂的混合使用,用以抵消彼此间的副作用。使组织固定达到优良的固定水平 |
5 | 醛糖钙固定液 | 甲醛100ml | 先将蔗糖和乙酸钙溶于蒸镏水,后加入甲醛。该固定液对于做酶的组织化学的研究效果较好,组织固定后,做冰冻切片,再给予显示。
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酒精:优点:1、 可保存尿酸结晶和糖原等物质。2、 能在任何比例的情况下与水混合,如组织的脱水,切片染色前后都离不开酒精,通常都用95%的工业酒精来配成60%、70%、80%、90%等不同的浓度来使用。 3、 可溶解苯类物质为染色步骤中的桥梁试剂。常规活检等切片上的石蜡必须除去,才能进行染色,能除去石蜡的物质有苯及汽油等,因此称它为桥梁试剂。4、 能除去切片上的水份,使切片无水化。切片经染色后,到*中已*无水,这样处理对于切片的保存是有好处的,否则,切片将会褪色。5, 可与其它试剂配成多种的混合固定液,加快固定,它的缺点是:1、 可溶解脂类物质,凡要证明组织是否含有脂类和类脂物时,切不能用含有酒精的固定液去固定组织,也不能用石蜡切片。2、 对组织收缩较大,不宜作单纯固定液。3、 渗透力不强。当用酒精固定组织时,组织表面很快就被固定,并形成了一层蛋白膜,这层膜可阻挡固定液向里渗透,造成了中间组织固定不佳的现象。4、 可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白,凡经酒精固定的组织,核的染色都不好。5、 可脱去切片上已着染的各种颜色,切片经染色后,一是必须洗去多余的染液,二是必须脱去切片上的水。在用酒精洗切片时,必须仔细地掌握显微镜下观察,还要掌握酒精的浓度,低浓底的酒精脱色力强,稍不注意,便可脱去切片上大部分的颜色。切片脱水时,要较快地通过低浓度的酒精,以免使已着染的颜色被脱去。
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6 | Carnoy氏固定液 | LF 300ml | 该固定液固定组织快速,在固定的同时兼有脱水的作用。溶液中的lf和酒精,对组织的收缩较厉害,但应用了冰醋酸,这种现象便被中和去 |
7 | AF固定液 | 甲醛 100 ml | 这种固定液的作用与上液有相似之处,但要注意的是,凡使用含有醋酸的固定液,其脱水用具不能使用铜制的脱水盒,因冰醋酸跟铜离子起反应,生成醋酸铜,这种物质可沉淀于组织间,可破坏组织中的抗原,造成免疫组化检测的失败。应用时应多加注意 |
冰醋酸:优点有:1、 能迅速固定染色质,助于染色,用醋酸配成的固定液,其作用快,固定效果均匀,对于染色质的固定快,因此,用其作固定的切片染色好,在配其它染色液如明矾苏木素和伊红时,常常需加入一定量的醋酸,以促进染色。2、 能使组织尤其是富含纤维的组织膨胀。各种固定液对组织都有收缩的作用,尤其是对富含纤维的组织。而它不但不会使组织收缩,而且还会令许多组织发生膨胀的作用。不足之处:1、 不能作为单一的固定剂。 2、 不能凝固蛋白质,不能保存白细胞颗粒,红细胞及含血铁黄素等。 | |||
8 | Zenker氏固定液 | 重铬酸钾 25G
| 先将重铬酸钾和sg溶于水中,尢其是重铬酸钾,应用热水或加温的方法将其溶解,然后过滤贮存于带盖的玻璃瓶中以防失效。临用时,取贮存液950ml,加入50ml的冰醋酸,即可使用。应用该固定液固定的组织,一般不要超过24h,取出组织,流水冲冼12小时以上,然后保存于75%-80%的酒精中,在切片染色前,必须用碘除去汞盐的沉着。应用该固定液的组织,细胞核及细胞浆染色十分清晰,特别是要显示骨骼肌的横纹时,应用本液可获得满意的结果,但由于其含有醋酸,故不能用于保存细胞颗粒,红细胞及含铁血黄素。 |
9 | Flemming氏液 | 2%酸水溶液 200ml | 该液中的奥酸对脂肪组织既有固定作用,又有染色作用,对有髓神经纤维也有固定兼染髓鞘的作用。如果做HE的染色,该液不适合。应用该液固定的组织,切片不能太大过厚,一般1-2毫米厚固定时间1-3天,后经水洗,保存于80%酒精中,除上述两液体外,还有Bouin氏液和Carnoy氏液等。 |
重铬酸钾: 它的优点是:1、 能固定脂肪及类脂物。2、 为髓鞘及嗜铬细胞优良的媒染剂。3、 可配成多种的混合固定液足之处有:1、 不能沉淀蛋白质,它必须和醋酸配成混合固定液,方能发挥作用,产生铬酸,沉淀蛋白质。2、 具有毒性及产生高温。在配制液体时,如清洗剂,当加入硫酸时,可产生很高的温度,并挥发出刺鼻的气体,应特别注意。3、 它不能长期固定组织,经它固定的组织应充分水洗后保存于80%酒精中。 | |||
10 | Helly氏液 | 重铬酸钾 25g | 临用时加入甲醛,因其加入后于24小时后可发生沉淀而失效,因用时应特别注意。该液是白细胞颗粒的优良固定剂,因此凡为白细胞或造血器官如骨髓,脾脏及患先天性梅毒之肝脏等,可用此液固定。此液原配方要求加入硫酸钠,但据我们经验认为,硫酸钠在液中对组织无任何作用,故省去 |
11 | Orth氏液 | 重铬酸钾 20g | 该液固定组织较缓慢,不适合于作临床的活检固定液,4毫米厚的组织固定时间需36-72小时,该液对于染色质的固定好,显示清晰,但可溶解部分红细胞和含铁血黄素。 重铬酸钾的不足之处有: 1、 不能沉淀蛋白质,它必须和醋酸配成混合固定液,方能发挥作用,产生铬酸,沉淀蛋白质。 2、 具有毒性及产生高温。在配制液体时,如清洗剂,当加入硫酸时,可产生很高的温度,并挥发出刺鼻的气体,应特别注意。 3、 它不能长期固定组织,经它固定的组织应充分水洗后保存于80%酒精中 |