抗荧光衰退封片剂的选择CITIFLUOR
时间:2017-05-27 阅读:2893
抗荧光衰退封片剂CITIFLUOR™ -(Antifadent Mountant Solutions)
一系列特意为免疫荧光反应封片设计的产品,*的配方使得染料的荧光不再衰退。常用的抗荧光衰退封片剂有AF1、AF2、AF3、AF4、AF87、AF100、AF200、AF300、CFM-1、CFM-2等等。其中部分产品含DAPI,可衬染细胞核或衬染DNA的实验。
关于抗荧光淬灭剂,常见的三种:酚型的没食子酸丙酯n-Propyl gallate (NPG)、胺型的对苯二胺p-Phenylenediamine (PPD)、胺型的 1,4-Diazabicyclo-octane(DABCO)三乙烯二胺。荧光淬灭的基本理论是这样滴:组织切片中的普通溶解氧在激发态时变成了单线态氧,单线态氧类似氧自由基,这个东西就是荧光淬灭的主要元凶,我们加入的抗淬灭剂主要是与这个元凶反应,直接清除单线态氧。注意,封片剂中加入抗淬灭剂,往往在激发的初级阶段使荧光总量降低,还有与DNA结合染料反应的风险。看看这三种试剂的优缺点吧:PPD可以与花菁染料反应(尤其Cy2),故这类染料封片考虑不用含PPD的封片剂;NPG,无毒,活细胞荧光染色这类封片剂,但是NPG对细胞凋亡的过程有所干涉,进行此类研究的同学多注意啦,尽量避开含有NPG的封片剂;DABCO不像PPD那样有效且毒性低,可以用于活细胞,但是与NPG一样,对细胞凋亡的过程有所干涉。
大量的封片剂堆砌在这里,怎样快速的找到自己需要的那个呢?简单的思路是:
*步,凝固型还是非凝固型?凝固起来贮存和拿取很方便,要考虑的是凝固过程中组织片的收缩以及需要脱水步骤的收缩。非凝固型需要考虑的是封片剂的挥发和侧漏,当然需要盖玻片啦(有时还需要硅胶密封垫spacer),而且往往盖玻片还需要密封起来,常用指甲油、牙科蜡、VALAP (equal mixture of Vaseline, lanolin, and paraffin mixed on a heating plate 60°C)在盖玻片周围涂一下,指甲油干固所需时间较长,有污染镜头的风险;牙科蜡在常温拿下能较快固化;VALAP (equal mixture of Vaseline, lanolin, and paraffin mixed on a heating plate 60°C)在活细胞封固中很常用。
第二步:需要甘油基(水溶性)的还是非甘油基(脂溶性)的?甘油可以与任何比例的水混溶,可以与乙醇相溶,但不与油混溶。知道这些,选择起来就简单多了。你的组化反应体系是怎样的?含水,就选甘油基(水溶性的)的。经过严格脱水处理,就选非甘油基的(油溶性的)。
第三步、封片剂的折射率。染色的片子用封片剂选择折射率在1.52至1.54之间透明度*;未染色组织用有很高或很低折光率的封片剂封固,这样的封片剂可以消除球面相差,获得*的图像。
介绍用到的成膜剂:
聚乙烯醇poly (vinyl alcohol):有机高分子物质,无毒,可溶于水,常用的一种成膜剂。根据其聚合度和醇解度的不同编为不同的号码,例如Mowiol® 4-88。PVA也可以加入其他物质或者反应进行改性处理, 例如Permafix-1就是改性的PVA。
聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone)简称PVP,是一种非离子型高分子化合物,也是常用的成膜剂。
甘油基 | 非甘油基 | |
非凝固型 | AF1 CFM-1+Antifadent AF1+DAPI CFM-1 AF2 CFM-2 AF4 CFMR-2 AFP1 CFM-3 | AF3 AFR3 AF87 |
凝固型 | AF200+Tris MWL 4-88 AF300+Tris MWL 4-88 AF200+CFPVOH AF300++CFPVOH | PVP+Antifadent(折射率1.5) CFPVOH+Antifadent CFPVOH+AF100 PF+AF100 |
产品选购指南:
l AF1:基本成分是甘油、PBS缓冲液、抗荧光淬灭剂、其它成分等,折射率1.46,PH10左右,适于用于检测浸泡在甘油中的组织切片、死细胞、 FISH (including CARD-FISH)等的封片。
l AF2:基本成分是甘油、抗荧光淬灭剂、其它成分等,没有自身的缓冲液。折射率1.47,该产品的优势在没有自身缓冲液,可以与任意其它缓冲液相容。
l AF3:基本成分是PBS缓冲液、抗荧光淬灭剂、其它成分,折射率1.34,对于活细胞检测特别适用。
l AFR3: 基本成分是PBS缓冲液、一种型的抗荧光淬灭剂(非胺非酚型)、其他成分等。
l AF4:又称Glycerol/n-propyl gallate mounting medium封片剂,添加的抗荧光衰退剂是没食子酸丙酯n-Propyl gallate (NPG)。
l AF87:特别的地方是含有无荧光浸油,这是为在高倍镜下观察特别设计的封片剂,对于DAPI染色特别有用(DAPI 在甘油基封片剂中有疏散的倾向)。
l AF100:基本成分是PBS缓冲液、抗荧光衰退剂、其他成分等,这是一款不含甘油的封片剂,需要与CFPVOH溶液配套使用。需要预先混合AF100和CFPVOH溶液,用多少混合多少,混合后10小时内用完。该封片剂的折射率1.34-1.35.
l AF200:与AF100类同,不同的是,AF200是甘油基的,胺基型抗荧光衰退剂,适于花青素、Alexa、Hoeches等封片。
l AF300:与AF100类同,不同的是,AF300是甘油基的,酚基型抗荧光衰退剂。
l CFM系列的封片剂的折射率均是1.52,等于或者近似等于所用载片和盖片玻璃的折射率,这对图像的获得很有帮助。主要于激光共聚焦显微镜下使用,或者高倍镜需要浸油的情况下来替代浸油。CFM-1的pH约6.5,.CFM-1 Plus Antifadent的PH值大约10, CFM-2的pH of约~8.5,CFM-3的PH值接近中性。
订购信息:
货号 | 产品名称 | 规格 |
17970-25 | CitiFluor™ AF1 | 25 ml |
17970-125 | CitiFluor™ AF1+DAPI | 15ml |
17971-25 | CitiFluor™ AF2 | 25 ml |
17972-25 | CitiFluor™ AF3 | 25 ml |
17973-10 | CitiFluor™ AFR3 | 10ml |
17973-25 | CitiFluor™ AF4 | 25ml |
17976-10 | CitiFluor™ AF87 | 10 ml |
17977-10 | CitiFluor™ AF200 | 10ml |
17977-25 | CitiFluor™ AF300 | 10ml |
17977-50 | CitiFluor™ PVP-1 | 25ml |
17977-100 | CitiFluor™ PVP-1+antifadent | 25ml |
17977-150 | CitiFluor™ MWL4-88 | 25ml |
17978-35 | Set of CitiFluor™ CFPVOH and AF100 | 25 ml+ 5 ml |
17980-10 | CitiFluor™ CFM-1 | 10ml |
17981-10 | CitiFluor™ CFM-1+antifadent | 10ml |
17982-10 | CitiFluor™ CFM-2 | 10ml |
17979-10 | CitiFluor™ CFMR-2 | 10ml |
17979-20 | CitiFluor™ CFM-3 | 10ml |
17979-50 | CitiFluor™ PF | 10ml |