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抗荧光衰退封片剂的选择CITIFLUOR

时间:2017-05-27      阅读:2893

抗荧光衰退封片剂CITIFLUOR™ -(Antifadent Mountant Solutions)

一系列特意为免疫荧光反应封片设计的产品,*的配方使得染料的荧光不再衰退。常用的抗荧光衰退封片剂有AF1、AF2、AF3、AF4、AF87、AF100、AF200、AF300、CFM-1、CFM-2等等。其中部分产品含DAPI,可衬染细胞核或衬染DNA的实验。

关于抗荧光淬灭剂,常见的三种:酚型的没食子酸丙酯n-Propyl gallate (NPG)、胺型的对苯二胺p-Phenylenediamine (PPD)、胺型的 1,4-Diazabicyclo-octane(DABCO)三乙烯二胺。荧光淬灭的基本理论是这样滴:组织切片中的普通溶解氧在激发态时变成了单线态氧,单线态氧类似氧自由基,这个东西就是荧光淬灭的主要元凶,我们加入的抗淬灭剂主要是与这个元凶反应,直接清除单线态氧。注意,封片剂中加入抗淬灭剂,往往在激发的初级阶段使荧光总量降低,还有与DNA结合染料反应的风险。看看这三种试剂的优缺点吧:PPD可以与花菁染料反应(尤其Cy2),故这类染料封片考虑不用含PPD的封片剂;NPG,无毒,活细胞荧光染色这类封片剂,但是NPG对细胞凋亡的过程有所干涉,进行此类研究的同学多注意啦,尽量避开含有NPG的封片剂;DABCO不像PPD那样有效且毒性低,可以用于活细胞,但是与NPG一样,对细胞凋亡的过程有所干涉。

大量的封片剂堆砌在这里,怎样快速的找到自己需要的那个呢?简单的思路是:

*步,凝固型还是非凝固型?凝固起来贮存和拿取很方便,要考虑的是凝固过程中组织片的收缩以及需要脱水步骤的收缩。非凝固型需要考虑的是封片剂的挥发和侧漏,当然需要盖玻片啦(有时还需要硅胶密封垫spacer),而且往往盖玻片还需要密封起来,常用指甲油、牙科蜡、VALAP (equal mixture of Vaseline, lanolin, and paraffin mixed on a heating plate 60°C)在盖玻片周围涂一下,指甲油干固所需时间较长,有污染镜头的风险;牙科蜡在常温拿下能较快固化;VALAP (equal mixture of Vaseline, lanolin, and paraffin mixed on a heating plate 60°C)在活细胞封固中很常用。

第二步:需要甘油基(水溶性)的还是非甘油基(脂溶性)的?甘油可以与任何比例的水混溶,可以与乙醇相溶,但不与油混溶。知道这些,选择起来就简单多了。你的组化反应体系是怎样的?含水,就选甘油基(水溶性的)的。经过严格脱水处理,就选非甘油基的(油溶性的)。

第三步、封片剂的折射率。染色的片子用封片剂选择折射率在1.52至1.54之间透明度*;未染色组织用有很高或很低折光率的封片剂封固,这样的封片剂可以消除球面相差,获得*的图像。

介绍用到的成膜剂:

聚乙烯醇poly (vinyl alcohol):有机高分子物质,无毒,可溶于水,常用的一种成膜剂。根据其聚合度和醇解度的不同编为不同的号码,例如Mowiol® 4-88。PVA也可以加入其他物质或者反应进行改性处理, 例如Permafix-1就是改性的PVA。

聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone)简称PVP,是一种非离子型高分子化合物,也是常用的成膜剂。

 

甘油基

非甘油基

非凝固型

AF1 CFM-1+Antifadent

AF1+DAPI CFM-1

AF2 CFM-2

AF4 CFMR-2

AFP1 CFM-3

AF3

AFR3

AF87

凝固型

AF200+Tris MWL 4-88

AF300+Tris MWL 4-88

AF200+CFPVOH

AF300++CFPVOH

PVP+Antifadent(折射率1.5)

CFPVOH+Antifadent

CFPVOH+AF100

PF+AF100

产品选购指南:

l AF1:基本成分是甘油、PBS缓冲液、抗荧光淬灭剂、其它成分等,折射率1.46,PH10左右,适于用于检测浸泡在甘油中的组织切片、死细胞、 FISH (including CARD-FISH)等的封片。

l AF2:基本成分是甘油、抗荧光淬灭剂、其它成分等,没有自身的缓冲液。折射率1.47,该产品的优势在没有自身缓冲液,可以与任意其它缓冲液相容。

l AF3:基本成分是PBS缓冲液、抗荧光淬灭剂、其它成分,折射率1.34,对于活细胞检测特别适用。

l AFR3: 基本成分是PBS缓冲液、一种型的抗荧光淬灭剂(非胺非酚型)、其他成分等。

l AF4:又称Glycerol/n-propyl gallate mounting medium封片剂,添加的抗荧光衰退剂是没食子酸丙酯n-Propyl gallate (NPG)。

l AF87:特别的地方是含有无荧光浸油,这是为在高倍镜下观察特别设计的封片剂,对于DAPI染色特别有用(DAPI 在甘油基封片剂中有疏散的倾向)。

l AF100:基本成分是PBS缓冲液、抗荧光衰退剂、其他成分等,这是一款不含甘油的封片剂,需要与CFPVOH溶液配套使用。需要预先混合AF100和CFPVOH溶液,用多少混合多少,混合后10小时内用完。该封片剂的折射率1.34-1.35.

l AF200:与AF100类同,不同的是,AF200是甘油基的,胺基型抗荧光衰退剂,适于花青素、Alexa、Hoeches等封片。

l AF300:与AF100类同,不同的是,AF300是甘油基的,酚基型抗荧光衰退剂。

l CFM系列的封片剂的折射率均是1.52,等于或者近似等于所用载片和盖片玻璃的折射率,这对图像的获得很有帮助。主要于激光共聚焦显微镜下使用,或者高倍镜需要浸油的情况下来替代浸油。CFM-1的pH约6.5,.CFM-1 Plus Antifadent的PH值大约10, CFM-2的pH of约~8.5,CFM-3的PH值接近中性。

订购信息:

货号

产品名称

规格

17970-25

CitiFluor™ AF1

25 ml

17970-125

CitiFluor™ AF1+DAPI

15ml

17971-25

CitiFluor™ AF2

25 ml

17972-25

CitiFluor™ AF3

25 ml

17973-10

CitiFluor™ AFR3

10ml

17973-25

CitiFluor™ AF4

25ml

17976-10

CitiFluor™ AF87

10 ml

17977-10

CitiFluor™ AF200

10ml

17977-25

CitiFluor™ AF300

10ml

17977-50

CitiFluor™ PVP-1

25ml

17977-100

CitiFluor™ PVP-1+antifadent

25ml

17977-150

CitiFluor™ MWL4-88

25ml

17978-35

Set of CitiFluor™ CFPVOH and AF100

25 ml+ 5 ml

17980-10

CitiFluor™ CFM-1

10ml

17981-10

CitiFluor™ CFM-1+antifadent

10ml

17982-10

CitiFluor™ CFM-2

10ml

17979-10

CitiFluor™ CFMR-2

10ml

17979-20

CitiFluor™ CFM-3

10ml

17979-50

CitiFluor™ PF

10ml

 

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