体外重组蛋白表达的蛋白纯化标签如何选择
时间：2021-08-26 阅读：1276
那么下面上海金鹏分析仪器有限公司为大家简单介绍一下关于体外重组蛋白表达的蛋白纯化标签如何选择。
体外重组蛋白表达技术已经渗透到生物学的各个领域。目前，体外重组蛋白表达系统主要有四类：原核表达系统、哺乳动物细胞表达、酵母表达系统及昆虫细胞表达。表达的一般实验包括载体构建-表达鉴定-蛋白纯化三大步骤。在构建载体阶段，除了一些必要的表达元件，还需要考虑的密码子优化和标签的选择。选择合适的标签不但有利于蛋白的纯化，促进蛋白的可溶性，同时也不能影响蛋白的结构功能和下游应用。感谢使用上海金鹏蛋白纯化系统Blupadstart进行蛋白纯化分离实验。
本文详细介绍了几种蛋白纯化标签，帮助我们更好的设计实验。
蛋白纯化标签比较
| 融合标签 | 大小（KD） | 功能 | 是否切除 |
| HIS | 0.84 | 有利纯化，能纯化可溶性/包涵体蛋白 | 标签小，对蛋白无影响 |
| GST | 26 | 增强蛋白可溶性，仅能纯化可溶性蛋白，屏蔽毒性蛋白 | 标签较大，影响较大 |
| MBP | 44.4 | 增强蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白 | |
| NusA | 55 | 增强蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白 | |
| SUMO | 11.2 | 增强可溶性，屏蔽毒性蛋白 |
表1：各个标签性能对比表
HIS-Tag（组氨酸标签）
HIS-Tag蛋白纯化的标签
HIS-Tag本身的特性对目的蛋白没有影响，不会形成二聚体；
分子量较小，只有0.84KD，对蛋白的下游应用不会产生影响；
原性低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行并制备抗体；
HIS-Tag与的转录翻译机制兼容，有利于蛋白表达；
可与其他标签构建双标签表达，可用于多种蛋白表达系统，纯化条件温和对蛋白影响较小。
GST-Tag（谷胱甘肽巯基转移酶标签）
GST-Tag相对分子质量较大，约为26KD，插入在目的蛋白的C末端或N末端，大肠杆菌中常用在N端。GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 蛋白本身是一个在**过程中起到重要作用的转移酶。一般选择GST标签的目的有两个，一是提高蛋白表达的可溶性，二是提高蛋白的表达量。蛋白表达纯化结束后需根据不同的蛋白应用而确定是否切除标签，标签较大，切除与否需根据下游应用考虑。如果要去除GST融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。检测方法可用GST抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。
HIS-Tag由6-10个组氨酸残基组成，分子量不到0.84KD，，通常插入在目的蛋白的C末端或N末端。HIS-Tag是目前原核表达常用的标签，蛋白纯化完之后可以不需切除此标签，也不会对蛋白产生功能影响。同时，蛋白纯化步骤简便，纯化条件温和，对蛋白也不会产生太大影响。
以上就是上海金鹏分析仪器有限公司为大家整理总结关于体外重组蛋白表达的蛋白纯化标签如何选择。
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