乙脑病毒IgM检测试剂盒（酶联免疫法）

预期用途

乙脑病毒IgM检测 ELISA试剂盒可用于人血清中抗重组抗原（来源于JEV）的IgM抗体的检测。这一检测有助于人是否感染了JEV的诊断。此试剂盒并不用于血液或血液成分的筛查，且该试剂盒尚未针对疫喵诱导的血清转化研究进行优化，因而仅供专业人士和体外诊断用。

检测原理

JE检测MAC-ELISA由一种酶促扩增的“两步”夹心式免疫测定法组成。在测试中，JE阴性质控，阳性质控和使用样本稀释液稀释的未知样本首先加入到包被有抗人IgM的微孔板上进行温育，洗板之后分别与JEV衍生的重组抗原（JERA）和正常细胞抗原（NCA）一起温育。再次洗板后加入HRP标记的抗乙脑抗体。洗板，加入TMB作为显色剂，一段时间后加入硫酸以终止底物反应。所形成的颜色深度与样本中的特异性抗体成正比。当吸光度高于一定值时，JERA和质控品的吸光率可准确地测定JEV抗体是否存在。

试剂盒组成成分
乙脑病毒IgM检测 ELISA试剂盒包含了足够用于96孔的试剂。此试剂盒包含的成分有：
JE IgM检测用的特定材料：

■JEV人IgM检测用微孔板：包被有抗人IgM抗体的96孔聚苯乙稀微孔板，在2-8℃下储存备用，包被了抗人IgM的微孔可用来捕获人样品中的IgM抗体。

■IgM样品稀释液：25ml ，1瓶，2-8℃下贮存，即用。
注意：如果稀释液出现沉淀，先旋涡混合再使用。

■JE IgM 阳性质控：1支50μl热灭活灭活血清。JE IgM阳性质控用于辅助监测试剂的完整性。2-8℃下储存至使用。在使用前短暂地迅速摇匀试剂，以收集瓶底的成分。

■JE阴性质控：1支50μl热灭活血清，JE阴性质控用于辅助监测试剂的完整性，2-8℃下储存至使用。在使用前短暂地迅速摇匀试剂，以收集瓶底的成分。

注意：若需长时间储存（＞1周）血清应分装储存在-70℃或-20℃。

■JE抗原（JERA）：1支，3ml即用型的JERA，2-8℃下贮存，即用

■正常细胞抗原（NCA）：1支，3ml即用型的JERA，2-8℃下贮存，即用

■10X的洗涤液：1瓶120ml，在整个过程的洗板步骤中120mL的洗涤液将被使用，在2-8℃下储存。

■Enwash:1瓶，20ml，Enwash在加酶联物后的洗板程序之间使用，在2-8℃下贮存备用。

■用于JE IgM检测的即用型 HRP酶标物：1瓶, 6ml，内含预稀释好的HRP黄热病毒活性单克隆抗体，在2-8℃下贮存备用。
注意该试剂任何时候都应该在避光条件下保存。

■TMB底物液： 1瓶，9ml，在2-8℃下贮存备用。

注意：底物液应时刻存放于试剂盒所提供的避光瓶里。
■ 终止液：1瓶6ml，用来终止酶反应，2-8℃下贮存备用。
警告：强酸；穿保护手套、面罩和戴安全眼镜，弃置所有材料均应按照安全条例与规则进行。

检测所需材料（试剂盒内未提供）

试剂盒检测步骤

1.阳性质控，阴性质控应在乙脑重组抗原和正常细胞抗原试验中做双孔检测。未知样本可以做单孔或双孔检测，但乙脑重组抗原和正常细胞抗原试验中都必须检测，一个96孔板多可检测44个样本，具体可参考本节末尾的流程图。

2、标记好试验所需包被板

3、用所提供的样品稀释液将待测血清和质控稀释至1/100，用小聚苯乙烯软管完成稀释。至少使用4ul的血清样品，阴性、阳性质控。例如4µl的血清加入396µl的样品稀释液配制出1/100的稀释液。

4、用多头或单头的移液管将稀释的样品，阴性质控，阳性质控各50ul加入相应的微孔中，以下加入44份测试血清的范例

5、 用封板胶仅在开放的微孔表面封板，所有板条的底部是不需要覆盖的。
注意：这样是为了保证温度均匀的分布在每个孔的底部和边缘。一旦顶部密封阻碍了蒸发，任何多余的封板胶必需被剪掉。
6. 37℃下保湿温育板条1小时。
注意：不要将微孔板板条的顶部叠起，必须单独地分层平辅。这对于温度的平等分布非常重要。不要使用CO2或任何气体，不要让板条接触任何湿润的物质，如湿纸巾等。详见英文说明书。

7.孵育后，使用自动洗板机用1X 的洗涤缓冲液洗板6次，每孔300ul

8.用多头的移液器在A-D列加入50ul的乙脑重组抗原，E-H列加入50ul的正常细胞抗原；以下为加入JERA和NCA的应用范例：

9.用封板胶仅在开放的微孔表面封板，所以板条的底部是没有覆盖的。

10.在孵育器中37℃下温育板条1小时

11.在温育后，用自动洗板机洗板6次，每次洗板时每孔使用300µl的洗涤液

12.用多头的移液器每孔加入50µl的HRP标记的酶联物

13用封板胶仅在开放的微孔表面封板，所以板条的底部是没有覆盖

14.在37℃下避光温育板条1小时

15.温育后，使用洗板液，用自动洗板机洗板6次。

16.用头多的移液器在每孔中加入150µl的Enwash

17.不用封板，在室温下温育5分钟

18.在温育后，使用1X的洗板液，用自动洗板机洗板6次

19.用多头的移液管每孔加入75µl的液态TMB底物液。

20.不用封板，将微孔板在室温下避光静置10分钟。

21.用多头的移液管在每孔中加入50µl的终止液，不用封板，在室温下孵育1min。

22.用酶标仪在450nm处读取OD值， 请确保酶标仪不会减去或标准化任何空白值或孔。

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