寨卡病毒IgM检测试剂盒

通用名称：寨卡病毒IgM ELISA试剂盒（捕获法）
英文名称：ZIKV DetectTM22.0  IgM Capture ELISA
产品规格：96T
产品货号：900223
产品品牌：美国Inbios

预期用途

此检测试剂盒用于定性检测人血清中抗寨卡病毒IgM抗体。还检测符合疾病控制中心和预防中心（CDC）临床和/或流行病学标准。仅用于科研，不作临床诊断。

检测原理

这一试剂盒是一种酶联捕获免疫测定法，用于检测靶向ZIKV包膜糖蛋白的人类IgM抗体。微量滴定孔预包被有抗人IgM的多克隆捕获抗体。将阳性质控，阴性质控和未知测试样品用样品稀释缓冲液稀释，然后加入适当位置的孔中。温育和洗涤后，分别加入即用型（RTU）ZIKV抗原（Zika Ag），交叉反应性质控抗原（CCA）和正常细胞抗原（NCA）到每个相应的孔中。

温育和洗涤后，将每种孔中加入即用型二抗溶液。在随后的温育和洗涤步骤后，将包含辣根过氧化物酶标记的抗小鼠抗体的酶联物溶液加入到每个孔中。洗涤后，将孔与四甲基联本胺（TMB）底物孵育。然后加入酸性终止溶液，并通过450nm处的吸光度测量来确定结果。如果存在靶向ZIKV包膜糖蛋白的人IgM抗体，则形成由IgM，抗原，第二抗体和酶联物组成的复合物。如果靶向ZIKV包膜糖蛋白的IgM抗体不存在，则将抗原，抗体和酶联物洗掉。结果分析包括原始OD450值和比较样品与给定抗原的反应性以正确分类样品的比率。

寨卡病毒IgM检测试剂盒组成成分
1、微孔板——12 x 8——用对人IgM特异的捕获抗体预包被。
2、阴性质控——1x50ul——用于验证实验的有效性，使用前短暂离心以去除任何的沉淀物。
3、阳性质控——1x50ul——用于验证实验的有效性，使用前短暂离心已去除任何的沉淀物。
4、样品稀释液——1x25mL——用于稀释所有的血清样本和质控品。在2-8℃储存，效期内有效。
5、即用型寨卡病毒重组抗原——1x3mL——该瓶含有包含Zika包膜糖蛋白的即用型（RTU）ZIKV抗原（Zika Ag）。
6、交叉反应质控抗原（CCA）——1x3mL——含可交叉反应的质控抗原。有助于结果解释。
7、正常质控抗原（NCA）——1x3mL——含正常质控抗原，有助于结果解释。
8、即用型二抗——1x9mL——含有靶向黄病毒抗原的二抗。
9、酶联物浓缩液（100 x）——1x150ul——含有HRP标记的抗鼠抗体，使用前充分混匀，在酶联物稀释液中稀释。
10、酶联物稀释液——1x9mL——用来稀释酶联物浓缩液。
11、洗涤浓缩液（10 x）——1x120mL
12、底物液——1x12mL——对光敏感。
13、终止液——1x9mL——用来终止反应。


检测步骤
1、阳性质控和阴性质控针对于Zika Ag、CCA和NCA三种抗原须做双孔检测，而样品只做单孔检测即可。
2、将板条做好标记。详见“排版示例”。
3、按照标记好的微孔，每孔加入50ul相应的阳性质控、阴性质控和样品，注意避免产生气泡。
4、完成后盖上保鲜膜。
5、放在37℃（±2℃）温育箱中温育1小时（±5分钟）。注意：微孔板不能叠加放置温育，必须单独平铺进行温育，不能使用CO2或其他气体的温育箱进行温育。不能将微孔板放置在任何潮湿的物品上。
6、温育完成后，用洗板机每次每孔300ul洗涤液洗板，共洗6次。
7、按照之前的分布，使用多通道移液器每孔加入50ul的Zika Ag、CCA及NCA，详见示例排版。
8、重复步骤4
9、重复步骤5
10、重复步骤6
11、使用多通道移液器，每孔加入50ul即用型的二抗。
12、重复步骤4
13、重读步骤5（孵育时间为30min）
14、重复步骤6
15、使用酶联物稀释液1:100倍稀释酶联物，按照需要的量配制，现配现用。
16、使用多通道移液器，每孔加入50ul新鲜配制的酶联物
17、重复步骤4
18、重读步骤5（孵育时间为30min）
19、重复步骤6
20、使用多通道移液器，每孔加入75ul的TMB底物液
21、室温（20-25℃）避光温育20分钟，无需封板。
22、使用多通道移液器，每孔加入50ul的终止液，室温温育至少1分钟。30min内读取OD值，超过30min会影响实验结果。
23、450nm处酶标仪读数。注意：请勿对空白孔或空白值调零，不能使用参考波长。否则会导致CCA和NCA的值降低和不正确的ISR值。

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