专业新筛采血滤纸（即用型）

【前言简介】

胰蛋白酶最初是由外分泌胰腺的腺泡细胞合成并分泌的，是胰蛋白酶原的前体或原酶（分子量-24,000）。已经认识到两种不同的胰蛋白酶原同工酶。两种形式都通过十二指肠肠激酶的作用转化为具有酶活性的胰蛋白酶。在存在CA ++离子的情况下，这种肠激酶可以从胰蛋白酶原中去除六肽Val-（Asp）4 -Lys，从而释放出胰蛋白酶的活性形式。

血液中出现三种特定的胰蛋白酶“酶活性”抑制剂：α1-抗胰蛋白酶，α2-宏球蛋白和α-胰蛋白酶间抑制剂。由于内源性因子与所使用的特定胰蛋白酶抗体之间存在竞争性和可变性的血清胰蛋白酶抑制作用，并且由于某些胰蛋白酶原未进入循环系统，因此新生儿胰蛋白酶ELISA与先前报道的测定方法一致，即将其测定的物种描述为“总免疫反应性胰蛋白酶”类似活动”或IRT。

作为样品，该测定利用一个3mm的打孔滤纸盘。该测定包括过夜孵育和1.25小时孵育。使用圆盘打孔，移液和洗板设备可以大大自动化该测定。

每个实验室必须确定正常范围，并与所使用的免疫试剂一致。由于不同测定系统之间的校准值不同，因此目前很难达到通用的正常范围。

【检测原理】

此试剂盒采用酶联免疫吸附测定（ELISA）技术对血斑样品中的人胰蛋白酶进行定量。在ELISA分析中，针对同一抗原的不同部分产生了两种互补的抗体构型。在ELISA中，一种抗体系统与微孔板结合，另一种抗体用酶标记。当存在抗原时，它同时以“桥”或“三明治”方式结合两种抗体。整个复合体仍然与孔相连。洗掉“未结合”的酶后，添加特定的底物并将其转化为有色的终产物，并用终止溶液迅速终止反应。

读取每个孔在450 nm处的吸光度，并将结果绘制为以ng / mL为单位的IRT浓度与方格纸上的吸光度的关系。

在此过程中，从在Schleicher和Schuell的＃903滤纸上收集的血迹打孔一张圆盘。将该盘与洗脱缓冲液一起放入抗体孔中。过夜孵育后，吸出洗脱缓冲液和血点，洗涤孔，并添加酶标记的抗体。第二次孵育后，将孔洗涤，并将底物添加到孔中。用终止溶液迅速终止酶反应，并读取吸光度。然后构建标准曲线，从中可以计算出未知浓度的胰蛋白酶。

兔抗IRT抗体

最重要的是，IRT ELISA利用IRT抗体，它具有针对IRT的“分子形式”的特异性。（23-27）

自从抗IRT的多克隆抗体的最初发展以来，我们已就该抗体与“病理”形式的IRT相对于正常循环形式增强的反应性报道了抗体。这种“病理学特异性”与所用标准品绝对值的定量差异无关，并且是抗体的功能。对该抗体进行广泛分析的结果表明，就其分子种类或相互作用而言，“病理IRT”比纯化的完整胰蛋白酶对我们的抗体表现出更大的“效力”。

注，此EIA-1278试剂盒使用的滤纸为“专业新筛采血滤纸（即用型）”，请咨询我们获取专业服务

深圳市科润达生物工程有限公司