ELISA试剂盒详细操作步骤：

1．取出试剂盒室温平衡30min，取出血样放至室温；

2．配标准品：取150uL标准品加入150uL标准品稀释液稀释，依次稀释5次；

3．加样：分别于各反应孔中加入标准品50uL，样品40UL，标准品做复孔，样品做3孔；

4．分别于样品孔中加入10UL抗体；

5．标准品和样品孔中分别加入50uL链酶亲和素-HRP，盖上封板膜,轻轻震荡混匀，37℃温育60min；

6．配洗涤液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用；

7．洗涤：小心揭开封板膜，弃去液体，甩干，每孔加200uL洗涤液，静置30s后弃去，如此重复5次，拍干；

8．显色：每孔先加入显色剂A 50uL，再加显色剂B 50uL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色6min；

9． 终止：每孔加入终止液50uL，终止反应（此时蓝色立即转为黄色）；

10．测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度。测定应在加终止液10min之内进行；

11．保存结果，收拾桌面；

12．分析处理数据。

ELISA试剂盒注意事项：

1. 取出板条前恢复到室温后再打开外包装袋，实验中不用的板条立即放回包装中，密闭封口，其余不用试剂应盖好；

2. 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染；

3．实验板孔加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应孔的孵育时间一致；

4．洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水；

5．试剂盒内试剂请在保质期内使用，不同批号试剂不要混用；

6．1000pg/ml以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到的结果。大于1000pg/ml 的样品应以标准稀释缓冲液稀释后重做。在结果分析时，结合考虑相应的稀释度