上海瓦兰生物主要代理产品：
试剂盒：ELISA试剂盒、检测试剂盒、免疫组化试剂盒、放免试剂盒、分子生物学试剂盒、金标检测试剂盒、Omega试剂盒、细胞凋亡试剂盒、生化试剂盒。
各种动物血清：内皮细胞血清、Hyclone、GIBCO胎牛血清。
抗体：进口原装抗体、进口分装抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、单标抗体、双标抗体、多标抗体、一抗、二抗；免疫组化抗体、免疫荧光抗体、流式细胞抗体、免疫细胞化学抗体。
生化试剂：*生化试剂、进口分装生化试剂。

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大霉素（Gentamicin）快速检测试剂盒说明书

一、原理

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物庆大霉素将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗庆大霉素抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物庆大霉素的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物庆大霉素的含量。

二、试剂盒特性

试剂盒灵敏度：  0.1ppb

样本检测下限

鸡肉、鸡肝 — — — — — — — — — — — — —  4ppb

交叉反应率

庆大霉素 —— — —— — — — — — — — —    100%

链霉素 ———— — ——— — — —— — — —   <1%

双氢链霉素 —— ——— —— — — —— — —   <1%

新霉素——————— —— — — —— ———    <1%

样本回收率

鸡肉、鸡肝——————————————70±10%

三、试剂盒组成

1. 微量测试孔：每条8孔，一板12条
2. 标准液×6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
3. 酶标记物         7ml………………红色帽
4. 抗体工作液       7ml………………蓝色帽
5. 底物 A液        7ml …………… 白色帽
6. 底物 B液        7ml………………黑色帽
7. 终 止 液         7ml………………黄色帽
8. 20×浓缩洗涤液   40ml ……………白色帽
9. 2×浓缩复溶液    50ml ……………透明帽

四、所用仪器、试剂

具备的仪器：微孔板酶标仪450/630nm、匀质器、振荡器、离心机、天平（感量0.01g）、刻度移液管

微量移液器：单道 20ul～200ul、100ul～1000 ul多道 250ul

试    剂：Na₂HPO₄·12H₂O、 NaH₂PO₄·2H₂O

五、样本前处理步骤

样本处理前须知

处理任何样本时，都必须注意：

（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。

（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。

样本前处理需配制：

配液1、将2×浓缩复溶液用去离子水按1：1稀释（1份浓缩复溶液+1份去离子水）。

配液2、0.2M PB缓冲液

52.0gNa₂HPO₄·12H₂O+8.8gNaH₂PO₄·

2H₂O 加去离子水定溶至1L。

鸡肉、鸡肝样本前处理方法

1. 取2±0.05g去除脂肪的粉碎样本与8ml 0.2MPB缓冲液混合5min，置56℃水浴环境放置30min；
2. 3000g以上，室温离心10min；
3. 取50ul上清液，加入450ul 稀释后的复溶液混匀，混合30s；
4. 取50ul用于分析。

样本稀释倍数：40

六、酶标免疫分析程序:

测定前应须知：

1. 使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20-25℃）。
2. 使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。
3. 在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4. 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜盖住微孔板。

操作步骤：

1. 将所需试剂从冷藏环境中取出，置室温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2. 取出需要数量的微孔及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。
3. 配液：将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水按照1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水），或按所需用量配制洗涤液。
4. 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5. 加标准品/样本50µl /孔，然后加酶标记物50μl/ 孔，再加入抗体工作液50µl/孔。轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，25℃环境反应60min。
6. 小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤液每孔250 µl充分洗涤4－5次，每次间隔15-30秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
7. 显色：每孔加入底物A液50μl，再加底物B液50μl，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显色15min。
8. 测定：每孔加入终止液50μl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，在5 min内读完数据），测定每孔OD值。

七、结果判定

结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含庆大霉素量成负相关。

1. 粗略判定

用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围（µg/L）。假设样本1的吸光度值为0.5，样本2的吸光度值为1.0，标准液吸光度值分别是：0ppb为1.675；0.1ppb为1.398；0.3ppb为1.197；0.9ppb为0.872；2.7ppb为0.510； 8.1ppb为0.213。则样本1的浓度范围是2.7ppb-8.1ppb; 样本2的浓度范围是0.3ppb-0.9ppb，乘以其对应的稀释倍数即为样本中庆大霉素实际浓度。

1. 定量分析

（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以*个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

B₀—0µg/L标准溶液的平均吸光度值

（2）标准曲线的绘制与计算

以标准品百分吸光率为纵坐标，以庆大霉素标准品浓度（µg/L）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中庆大霉素实际浓度。

若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（索取）

八、 注意事项

1. 室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2. 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3. 试剂混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。
4. 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5. 不要使用过了有效期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号的盒中试剂。
6. 将不用的微孔板放进自封袋密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7. 试剂变质的迹象

显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5时，表示试剂可能变质。

1. 该试剂盒*反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

九、储藏条件和保质期

储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，不要冷冻。

保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期

见包装盒。

提示：酶标板真空包装袋若有漏气，酶标板仍然正常有效，不影响实验结果，请放心使用。