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一氧化氮（Nitric Oxide，NO）含量检测试剂盒

商品货号：MS1804
英文名称：Nitric oxide Assay Kit
别名：一氧化氮含量检测试剂盒
检测方法：微量法

• 产品详细介绍

测定意义：

NO（Nitric Oxide，NO）广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中，特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质，发挥信号传递的作用，是一种新型的生物信使分子，在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。

测定原理：

NO在体内或水溶液中极易氧化生成 NO2-，在酸性条件下，NO2-与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在550nm处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算NO含量。为了排除样品色素等的影响，每个样品需做对照管。

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• 产品说明书
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货号：QS1804                        规格：50 管/24 样

一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量测定试剂盒说明书 可见分光光度法

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

NO（Nitric Oxide，NO）广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统 中，特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质，发挥信号传递的作用，是 一种新型的生物信使分子，在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。

测定原理：

NO 在体内或水溶液中极易氧化生成 NO₂^-，在酸性条件下，NO₂^-与重氮盐磺酸胺生成重氮化 合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在 550nm 处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计 算 NO 含量。为了排除样品色素等的影响，每个样品需做对照管。

自备实验用品及仪器：

天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 6mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体 6mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 12mL×1 瓶，4℃避光保存。

样品处理：

1. 组织：

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加 入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。

2. 细菌、真菌：

按照细胞数量（10^4个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时 间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 15min，取上清置于冰上待测。

3. 体液和培养液等其它液态样品：直接测定。

测定步骤和操作表

           对照管        测定管

样品（μ L）     400         400

试剂一（μ L）              250

试剂二（μ L）   250

试剂三（μ L）   250         250

混匀，4℃静置 15min，以对照管调零，1mL 玻璃比色皿，测定 A₅₅₀。

NO 含量计算：

标准曲线回归方程为：y= 0.016x -0.0103，R² = 0. 9986

1、组织样品：

NO 含量定义：25℃时，每克样品或每毫克蛋白 15min 生成 1μ moL NO₂ ^-，相当于 1μ moL NO。 （1）按样本质量计算

NO 含量（μ moL/g）=（A₅₅₀ +0.0103）÷0.016×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）×10^-3 = 0.14×（A₅₅₀ +0.0103）÷W

（2）按样本蛋白浓度计算

NO 含量（μ moL/mg prot）=（A₅₅₀ +0.0103）÷0.016×V 反总÷（V 样×Cpr）×10^-3 = 0.14×（A₅₅₀ +0.0103）÷Cpr

2、其他样品：

NO 含量定义：25℃时，每升样品 15min 生成 1μ moL NO₂^-，相当于 1μ moL NO。

NO 含量（μ moL/L）=（A₅₅₀ +0.0103）÷0.016×V 反总÷V 样 = 140×（A₅₅₀ +0.0103）

V 反总：反应总体积，0.9mL；V 样：反应中样品体积，0.4mL；V 样总：加入提取液体积，1mL； W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL

注意事项：

1. 试剂盒 2-8℃保存。

2. 尽量使用新鲜样品进行检测，试剂三有腐蚀性，操作时请做好防护措施。

3. 若检测出得 OD 值在标准曲线范围外，请将样品进行适当的浓缩或稀释，并在计算公式中除 以浓缩倍数或者乘以稀释倍数。

4. 低检出限为 0.65μ moL/L。

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