硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR) 活性测定试剂盒 技术文章
时间:2019-06-06 阅读:2150
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硫氧还蛋白氧化还原酶(Thioredoxin Reductase, TrxR) 活性测定试剂盒
商品货号:QS1110
英文名称:Oxidized Thioredoxin Reductase (TrxR) Assay Kit
别名:硫氧还蛋白氧化还原酶试剂盒 TrxR Kit 硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)试剂盒 硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)测试盒
检测方法:常量法
商品货号: | 商品品牌: | 规格 | 基本售价 | 选择规格 |
---|---|---|---|---|
QS1110-50管/48样 | 索桥生物 | 50管/48样 | ¥250.00元 |
- 产品详细介绍
测定意义:
TrxR是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶,属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员,与硫氧还蛋白以及NADPH共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR与GR活性类似,催化GSSG还原生成GSH,是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。
测定原理:
TrxR催化NADPH还原DTNB生成TNB和NADP+,TNB在412 nm有特征吸收峰,通过测定412nm波长处TNB的增加速率,即可计算TrxR活性。
- 产品说明书
货号:QS1110 规格:50 管/48 样
硫氧还蛋白氧化还原酶(thioredoxin reductase, TrxR) 活性测定试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
TrxR 是一种 NADPH 依赖的包含 FAD 结构域的二聚体硒酶,属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化 还原酶家族成员,与硫氧还蛋白以及 NADPH 共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR 与 GR 活性类似, 催化 GSSG 还原生成 GSH,是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。
测定原理:
TrxR 催化 NADPH 还原 DTNB 生成 TNB 和 NADP+,TNB 在 412 nm 有特征吸收峰,通过测定 412nm 波长处 TNB 的增加速率,即可计算 TrxR 活性。
自备实验用品及仪器: 可见分光光度计、低温离心机、可调节移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 90mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 5 mL 蒸馏水溶解。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加 入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时 间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。
TrxR 测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 412nm,用蒸馏水调零。
2. 试剂一在 25℃(一般物种)或者 37℃(哺乳动物)预热 30min。
3. 测定管:取 1mL 玻璃比色皿,加入 100μ L 试剂二,100μ L 试剂三,700μ L 试剂一,100μ L 上清液,迅速混匀后于 412 nm 测定 10 s 和 310 s 吸光度,记为 A3 和 A4。△A 测定管=A2-A1。
TrxR 活性计算公式:
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每毫克蛋白每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶活单位。
TrxR(nmol/min /mg prot)=△A 测定管÷ε ÷d×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T = 147×△A 测定管÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每克样本每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶活单位。
TrxR(nmol/min /g 鲜重)=△A 测定管÷ε ÷d×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T= 147×△A 测定管÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每 104个细胞每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶活单 位。
TrxR(nmol/min/104 cell)=△A 测定管÷ε ÷d×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T = 147×△A 测定管÷ 细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每毫升液体每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶活单位。
TrxR(nmol/min /mL)=△A 测定管÷ε ÷d×V 反总÷V 样÷T = 147×△A 测定管
ε :TNB 在 412nm 处的微摩尔消光系数,0.0136 L/μ mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总: 反应体系总体积(L),1000μ L=0.001 L;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定; V 样:加入反应体系中上清液体积(mL),100μ L=0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W, 样本质量,g;T:反应时间(min),5 min。
注意事项:
1. 测定前须先取 1~2 个样做预实验,哺乳动物组织及血液制品 TrxR 活力测定时,一般须用 蒸馏水稀释 5 倍左右;测定过程操作须迅速。
2. 试剂二和试剂三配制好后 3 天内使用完。
系列产品及单价
辅酶Ⅱ系列 | ||||
QS1100 | 辅酶ⅡNADP(H)含量测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 550 |
MS1100 | 辅酶ⅡNADP(H)含量测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 1000 |
QS1101 | NADP磷酸酶(NADPase)测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 520 |
MS1101 | NADP磷酸酶(NADPase)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 980 |
QS1102 | 6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 160 |
MS1102 | 6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 300 |
QS1103 | 胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 260 |
MS1103 | 胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 500 |
QS1104 | NADP苹果酸酶(NADP-ME)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 320 |
MS1104 | NADP苹果酸酶(NADP-ME)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 600 |
QS1105 | NAD-苹果酸酶(NAD-ME)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 350 |
MS1105 | NAD-苹果酸酶(NAD-ME)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 650 |
QS1106 | 6-磷酸葡糖糖酸脱氢酶(6PGDH)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 750 |
MS1106 | 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 1400 |
QS1107 | 肌酸激酶(CK)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 820 |
MS1107 | 肌酸激酶(CK)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 1500 |
QS1108-10 | 脂肪酸合成酶(FAS)测试盒 | 紫外分光光度法 | 10管/9样 | 1200 |
QS1108-25 | 脂肪酸合成酶(FAS)测试盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24样 | 2000 |
QS1108-50 | 脂肪酸合成酶(FAS)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 3200 |
MS1108 | 脂肪酸合成酶(FAS)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 6000 |
QS2508 | 蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 1600 |
MS2508 | 蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 3000 |
QS1110 | 硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 250 |
MS1110 | 硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 450 |
QS1111 | 谷胱甘肽还原酶(GR)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 260 |
MS1111 | 谷胱甘肽还原酶(GR)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 500 |