NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)试剂盒 说明 技术文章
时间:2019-06-10 阅读:2892
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NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)试剂盒
商品货号:QS1002
英文名称:NAD-Malate Dehydrogenase(NAD-MDH)Assay Kit
别名:NAD-苹果酸脱氢酶试剂盒 NAD-MDH Kit NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)试剂盒 NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒
检测方法:常量法
商品货号: | 商品品牌: | 规格 | 基本售价 | 选择规格 |
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QS1002-50 管/48 样 | 50 管/48 样 | ¥280.00元 |
产品详细介绍
测定意义:
MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH,细菌中通常只含有NAD-MDH,在真核细胞中,NAD-MDH分布于细胞质和线粒体中。
测定原理:
NAD-MDH催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。
产品说明书
货号:QS1002 规格:50 管/48 样
NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)试剂盒说明书 紫外分光光度法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中 MDH 是 TCA 循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中 MDH 催化草酰乙酸形成苹果酸。 草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH 在细胞多种生理活动中 扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病 性等。根据不同的辅酶特异性,MDH 分为 NAD-依赖的 MDH 和 NADP-依赖的 MDH,细菌中通常只 含有 NAD-MDH,在真核细胞中,NAD-MDH 分布于细胞质和线粒体中。
测定原理:
NAD-MDH 催化 NADH 还原草酰乙酸生成苹果酸,导致 340nm 处光吸收下降。
自备实验用品及仪器:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL 石英比色皿和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一: 提取液 60 mL×1 瓶,在 4℃保存;
试剂二: 液体 50 mL×1 瓶,在 4℃保存;
试剂三: 粉剂×2 支,-20℃保存;临用前加入 300μ L 蒸馏水,充分溶解待用;用不完的 试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四: 粉剂×2 支,-20℃保存;临用前加入 300μ L 蒸馏水,充分溶解待用;用不完的 试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
样本测定的准备:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 1000~5000:1 的比例(建议 2000 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一), 超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃ 离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织, 加入 1mL 试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、将试剂二在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上。
3、操作表:
试剂名称(μ L) | 测定孔 |
样本 | 20 |
试剂二 | 760 |
试剂三 | 10 |
试剂四 | 10 |
将上述试剂按顺序加入 1 mL 石英比色皿中,混匀后立即在 340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和反应 1min 后的吸光度 A2,计算 ΔA=A1-A2。
注意:若 A1-A2 大于 0.5,需将样本用提取液稀释,使 A1-A2 小于 0.5,可提高检测灵敏度。 计算公式中乘以相应稀释倍数。
NAD-MDH 活力单位的计算:
1、血清(浆)NAD-MDH 活力的计算
单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH(nmol/min/mL)=[Δ A×V 反总÷(ε ×d)×109 ]÷V 样÷T=6430×Δ A
2、组织、细菌或细胞中 NAD-MDH 活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH ( nmol/min/mg prot ) =[Δ A×V 反 总 ÷ ( ε ×d ) ×109 ]÷(V 样 ×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH(nmol/min/g 鲜重)=[Δ A×V 反总÷(ε ×d)×109 ]÷(W× V 样÷V 样总)÷T =6430×Δ A÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。 NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[Δ A×V 反总÷(ε ×d)×109 ]÷(2000×V 样÷V 样总) ÷T=3.215×ΔA
V 反总:反应体系总体积,8×10-4 L;ε :NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d: 比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应 时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;2000:细胞或细菌总数,2000 万。
系列产品及单价
辅酶Ⅰ系列 | ||||
QS1000 | 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 500 |
MS1000 | 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 920 |
QS1001 | 乳酸脱氢酶(LDH)测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 170 |
MS1001 | 乳酸脱氢酶(LDH)测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 330 |
QS1002 | NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 280 |
MS1002 | NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 550 |
QS1003 | NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 320 |
MS1003 | NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 600 |
QS1004 | NADH氧化酶(NOX)测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 450 |
MS1004 | NADH氧化酶(NOX)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 850 |
QS1005-50 | 柠檬酸合酶(CS)测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 3200 |
QS1005-25 | 柠檬酸合酶(CS)测试盒 | 可见分光光度法 | 25管/24样 | 2000 |
MS1005 | 柠檬酸合酶(CS)测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 3500 |
QS1006 | 丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 720 |
MS1006 | 丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 1400 |
QS1007 | 醇脱氢酶(ADH)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 280 |
MS1007 | 醇脱氢酶(ADH)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 550 |
QS1008 | 单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 800 |
MS1008 | 单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 1550 |
QS1009 | 乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 420 |
MS1009 | 乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 800 |
QS1010 | NAD激酶(NADK)测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 600 |
MS1010 | NAD激酶(NADK)测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 1100 |
QS1011 | 线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24样 | 1280 |
MS1011 | 线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 2500 |