碱性磷酸酶(AKP/ALP) 活性测定试剂盒 说明 技术文章
时间:2019-06-10 阅读:7104
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碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,AKP/ALP) 活性测定试剂盒
商品货号:QS2002
英文名称:Tissue and Blood Alkaline Phosphatase(AKP/ALP) Assay Kit
别名:组织及血液碱性磷酸酶试剂盒 AKP/ALP Kit 组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP)试剂盒
检测方法:常量法
商品货号: | 商品品牌: | 规格 | 基本售价 | 选择规格 |
---|---|---|---|---|
QS2002-50管/24样 | 索桥生物 | 50管/24样 | ¥160.00元 |
- 产品详细介绍
测定意义:
AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。
测定原理:
在碱性环境中,AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与4-氨基安替比林和六氰合铁酸钾反应红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510 nm吸光度增加速率,来计算AKP活性。
- 产品说明书
货号: QS2002 规格:50管/24样
碱性磷酸酶(alkaline phosphatase ,AKP/ALP) 活性测定试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
AKP/ALP 是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化 合物。AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。
测定原理:
在碱性环境中,AKP/ALP 催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与 4-氨基安替比林和六氰合铁酸钾反应红色亚醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通过测定 510 nm 吸光度增加速率,来计算 AKP 活性。
自备实验用品及仪器:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体×1 瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体×1 瓶,4℃避光保存,未变成蓝绿色之前均可使用。
标准品:液体×1 支(EP 管中),2 μ mol/mL 酚标准液,4℃保存。
粗酶液提取:
1. 组织:
按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加 入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆,4℃、8000g 离心 10min,取上清液待测。
2. 细菌或细胞:
按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建 议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒, 总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 血液可直接测定,或者适当稀释后测定。
测定步骤:
1. 分光光度计预热 30min,调节波长到 510 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂三置于 37℃水浴中预热 30 min。
3. 空白管:取 EP 管,加入 20μ L 蒸馏水,200μ L 试剂二,200μ L 试剂三,混匀后置于 37℃ 水浴中保温 15min;加入试剂四 600μ L,混匀后于 510 nm 测定吸光度,记为 A 空白管。
4. 标准管:取 EP 管,加入 20μ L 标准品,200μ L 试剂二,200μ L 试剂三,混匀后置于 37℃ 水浴中保温 15min;加入试剂四 600μ L,混匀后于 510 nm 测定吸光度,记为 A 标准管。
5.对照管:取 EP 管,加入 20μ L 上清液,200μ L 蒸馏水,200μ L 试剂三,混匀后置于 37℃ 水浴中保温 15min;加入试剂四 600μ L,混匀后于 510 nm 测定吸光度,记为 A 测定管。
6. 测定管:取 EP 管,加入 20μ L 上清液,200μ L 试剂二,200μ L 试剂三,混匀后置于 37℃ 水浴中保温 15min;加入试剂四 600μ L,混匀后于 510 nm 测定吸光度,记为 A 测定管。
注意:空白管和标准管只需测定一次。每个测定管设一个对照管。
AKP/ALP 活性计算:
1. 血液中 AKP/ALP 活力计算
活性单位定义:37℃中每毫升血液每分钟催化产生 1μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。
AKP/ALP 活力(μ mol/min /mL)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总] ÷V 样÷T=6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
2. 组织、细菌或细胞中 AKP/ALP 活性计算
(1)按照蛋白浓度计算
活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。
AKP/ALP(μ mol/min/mg prot)=[C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反 总]÷(Cpr×V 样)÷T=6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr
(2)按照样本质量计算
活性单位定义:37℃中每克组织每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。
AKP/ALP(μ mol/min/g 鲜重)=[C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反 总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷W
(3)按照细菌或细胞数量计算
活性单位定义:37℃中每 104个细菌或细胞每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。 AKP/ALP (μ mol/min/104 cell)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总]÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T= 6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷ 细胞数量
C标准品:2μ mol/mL;V 反总:反应体系总体积(mL),1020μ L=1.02 mL; V 样:加入反应 体系中上清液体积(mL),0.020mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间(min),15 min。
注意事项:
1.试剂二、试剂三和试剂四均需避光保存。
2.试剂四变蓝绿色后不能再使用。
3.加入试剂四后必须立即混匀,否则显色不*。
系列产品及价格
酯酶系列 | ||||
QS2000 | 乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 200 |
MS2000 | 乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 380 |
QS2001 | 组织及血液酸性磷酸酶(ACP)测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 160 |
MS2001 | 酸性磷酸酶(ACP)测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 310 |
QS2002 | 组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 160 |
MS2002 | 碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 310 |
QS2003 | 羧酸酯酶(CarE)测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 300 |
MS2003 | 羧酸酯酶(CarE)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 590 |