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酸性磷酸酶（Acid Phosphatase ，ACP） 活性测定试剂盒

商品货号：QS2001
英文名称：Tissue and Blood Acid Phosphatase（ACP）Assay Kit
别名：组织及血液酸性磷酸酶试剂盒 ACP Kit 组织及血液酸性磷酸酶（ACP）试剂盒
检测方法：常量法

• 产品详细介绍
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• 产品说明书

测定意义：                           

ACP在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸，常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。

测定原理：

在酸性环境中，ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚，苯酚与4-氨基安替和六氰合铁酸钾反应生成红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计算ACP活性。

货号: QS2001              规格：50管/24样

酸性磷酸酶（acid phosphatase ，ACP） 活性测定试剂盒说明书

       可见分光光度法

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

ACP 在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸，常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP 常用 于前列腺癌的辅助诊断。

测定原理：

在酸性环境中，ACP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚，苯酚与 4-氨基安替和六氰合铁酸钾反应生 成红色亚醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通过测定 510nm 吸光度增加速率，来计算 ACP 活 性。

自备实验用品及仪器：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体×1 瓶，4℃避光保存。

试剂四：液体×1 瓶，4℃避光保存，变成蓝绿色不能使用。

标准品：液体×1 支，2μ mol/mL 酚标准液，4℃保存。

粗酶液提取：

1. 组织：

按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加 入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、8000g 离心 10min，取上清液待测。

2. 细菌或细胞：

按照细菌或细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建 议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒， 总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3. 血液可直接测定，或者适当稀释后测定。

测定：

1.分光光度计预热 30 min，调节波长到 510 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于 37 o C 水浴中预热 30 min。

3. 空白管：取 EP 管，加入 20μ L 蒸馏水，200μ L 试剂二，200μ L 试剂三，混匀后置于 37℃ 水浴中保温 15min；加入试剂四 600μ L，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为 A 空白管。

4. 标准管：取 EP 管，加入 20μ L 标准品，200μ L 试剂二，200μ L 试剂三，混匀后置于 37℃ 水浴中保温 15min；加入试剂四 600μ L，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为 A 标准管。

5. 对照管：取 EP 管，加入 20μ L 上清液，200μ L 蒸馏水，200μ L 试剂三，混匀后置于 37℃ 水浴中保温 15min；加入试剂四 600μ L，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为 A 测定管。

6. 测定管：取 EP 管，加入 20μ L 上清液，200μ L 试剂二，200μ L 试剂三，混匀后置于 37℃ 水浴中保温 15min；加入试剂四 600μ L，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为 A 测定管。

注意：空白管和标准管只需做一次。每个测定管设一个对照管。

ACP 活性计算：

1. 血液中 ACP 活性计算

活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生 1μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。

ACP 活力(μ mol/min/mL)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总] ÷V 样÷T = 6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)

2. 组织、细菌或细胞中 ACP 活性计算

（1）按照蛋白浓度计算 活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。

ACP(μ mol/min/mg prot)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总] ÷(Cpr×V 样)÷T =6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr

（2）按照样本质量计算 活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。

ACP (μ mol/min/g 鲜重)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总] ÷(W×V 样÷V 样总)÷T = 6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷W

（3）按照细菌或细胞数量计算

活性单位定义：37℃中每 10⁴个细菌或细胞每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。

ACP (μ mol/min/10⁴ cell)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总] ÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T = 6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷细胞数量

C 标准品：2μ mol/mL；V 反总：反应体系总体积（mL），1020μ L=1.02 mL； V 样：加入反应 体系中上清液体积（mL），0.020mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间（min），15 min。

注意事项：

1、试剂二、试剂三和试剂四均需避光保存。

2、试剂四变蓝绿色后不能再使用。

3、加入试剂四后必须立即混匀，否则显色不*。

4、ACP 不稳定，尤其在 37℃和 pH 大于 7 的条件下活力丧失快，因此酸性磷酸酶样品一般需当 天准备；血清样品中，每毫升血清中加入 10mg 柠檬酸氢二钠或者 5mg 硫酸氢钠，使 pH 降 至 6.5 以下，或 5ml 血清加入 30%醋酸溶液 2～3 滴，置于 4℃可保存 1 周。

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