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结合态淀粉合成酶 （Granule-Bound Starch Synthase，GBSS）试剂盒

商品货号：QS3405
英文名称：Granule-bound starch synthase Assay Kit
别名：结合态淀粉合成酶试剂盒 GBSS Kit 结合态淀粉合成酶(GBSS）试剂盒
检测方法：常量法

产品详细介绍

测定意义：

GBSS（EC 2.4.1.21）以束缚态存在于淀粉体中，催化淀粉链的加长反应，主要负责直链淀粉的合成。

测定原理：

GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP；进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比，通过340nm下测定NADPH的增加量，可以计算GBSS活性。

产品说明书

货号：QS3405-50            规格：50 管/48 样

   结合态淀粉合成酶 （Granule-bound starch synthase，GBSS）试剂盒说明书 

            紫外分光光度法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

GBSS（EC 2.4.1.21）以束缚态存在于淀粉体中，催化淀粉链的加长反应，主要负责直链 淀粉的合成。

测定原理：

GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP； 进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化 NADP+还 原为 NADPH，其中 NADPH 生成量与前一步反应生成的 ADP 数量呈正比，通过 340nm 下测定 NADPH 的增加量，可以计算 GBSS 活性。

自备实验用品及仪器：

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：液体 60mL×2 瓶，4℃保存；

液体一：7mL×2 瓶，4℃保存；

液体二：4mL×2 瓶，4℃保存；

液体三：8mL×2 瓶，4℃保存；

粉剂一：2 支，4℃保存；

粉剂二：2 支，4℃保存；

粉剂三：2 支，-20℃保存；

粉剂四：2 支，4℃保存；

粉剂五：2 支，4℃保存；

粉剂六：2 支，-20℃保存；

粉剂七：2 支，-20℃保存；

粉剂八：2 支，4℃保存；

粉剂九：2 支，4℃保存；

粉剂十：2 支，-20℃保存；

试剂一：液体×1 支，-20℃保存；临用前加入 500μ L 蒸馏水，充分溶解备用；用不完的 试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入 500μ L 蒸馏水，充分溶解备用；用不完的 试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

反应液Ⅰ的配制：临用前取液体一、粉剂一、粉剂二和粉剂三各一支，依次把粉剂一、粉 剂二和粉剂三转移到液体一中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

反应液Ⅱ的配制：临用前取液体二、粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七各一支，依次把粉 剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七转移到液体二中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存， 禁止反复冻融。

反应液Ⅲ的配制：临用前取液体三、粉剂八、粉剂九和粉剂十各一支，依次把粉剂八、粉 剂九和粉剂十转移到液体三中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

粗酶液制备：

称取 0.1~0.2g 组织（建议称取约 0.1g 组织），加入 1mL 提取液，冰浴中匀浆。10000g ， 4℃离心 10min，弃上清，在沉淀中加入 1mL 提取液充分混匀，置冰上待测。

测定步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、在 EP 管中按顺序加入下列试剂 

混匀后立即在 340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2，计算 Δ A=A2-A1。

注意：反应液Ⅰ如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。

GBSS 活性计算：

1、按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。 GBSS（nmol/min/mg prot）＝[Δ A×V 反总÷（ε ×d）×10⁹ ]÷(V 样×Cpr) ÷T×稀释倍数 =522×Δ A÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2、按照样本鲜重计算

单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

GBSS 活性（nmol/min/g 鲜重）=[Δ A×V 反总÷（ε ×d）×109 ]÷（W ×V 样÷V 样总）÷T× 稀释倍数=522×Δ A÷W

V 反总：反应体系总体积，5.7×10^-4 L；ε ：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm； d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.15 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T： 反应时间，2 min；稀释倍数：1.71；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。