线粒体DNA提取试剂盒使用过程中注意事项
时间:2021-03-01 阅读:4063
线粒体DNA提取的关键是尽可能的去掉核DNA。利用差速离心到比较纯净的线粒体,再利用DNA酶消化裂解缓冲系统等多步骤去掉核DNA,后得到纯净的线粒体DNA。可用于PCR等对纯度要求较高的实验。
本试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织(肝或脑组织)和硬组织(肌肉)以及培养细胞线粒体DNA的提取制备。不适合植物及其他标本的提取。
在使用线粒体DNA提取试剂盒注意事项:
1.为保证获得完整及尽可能多的线粒体,匀浆条件要示:一是全程低温操作。二是快速。三是如用条件可将匀浆后的碎片在显微镜下观察。与组织块相比,培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁,因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
2.线粒体DNA本身含量很低,如果电泳检测不到,可加大上样量,用更少量的TE溶解沉淀,或者直接进入PCR检测。