Western Blot杂交膜转印膜*纤维素膜NC膜与PVDF膜的区别
时间：2012-02-01 阅读：11544
杂交膜转印膜*纤维素膜NC膜与PVDF膜的区别
杂交膜转印膜*纤维素膜NC膜与PVDF膜的区别
1. *纤维素膜
*纤维素膜是蛋白印迹广泛使用的转移介质，对蛋白有很强的结合能力，而且适用于各种显色方法，包括同位素，化学发光(Luminol类)、常规显色、染色和荧光显色；背景低，信噪比高。NC膜的使用也很简便，比如不需要甲醛预处理，只要在无离子水面浸润排出膜内气泡，再在电泳缓冲液中平衡几分钟就可以了；比如NC膜很容易封闭，也不需要特别严谨的清洗条件。转移到NC膜上的蛋白在合适的条件下可以稳定保存很长时间，不过要注意的是纯的硝纤膜在比较脆，又容易卷，操作要小心，不适合用于需要多次重复清洗的用途--因为经不起多次“折磨”。选择硝纤膜时要注意的是选择合适的孔径，通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜，小于20KD的话建议选择0.2um的，如果小于7KD的话好选择0.1um的膜。另外还要注意选择纯的NC膜--混有含醋酸纤维(CM)的NC膜结合力会有所降低。另外提醒一句：由于NC膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替，因此在封闭时好使用较温和的Tween20，而且浓度不要超过0.3%(据说0.05%效果好)。一般而言，NC膜越纯，其蛋白结合能力就越高，所以要增加WB的灵敏度和分辨率，提高所使用膜的纯度是个可以考虑的选择。如果NC膜搀杂一些醋化纤维素--这在前面已经提到，会影响蛋白质结合。Protran由于是纯NC膜，比较脆，机械耐受力欠佳，需要小心操作，如果担心自己“粗手粗脚”，那么就可以考虑一下Optitran或者Pall公司的以耐受力著称的BioTrace NT Nitrocellulose Transfer Membrane。卷膜肯定是实惠的选择，只不过要自己动手裁剪--切记，必须带手套操作。
*纤维素膜生产商：
*纤维素膜生产商：
GE WHATMAN BA83 BA85 价格 1950.00/卷 有现货
WHATMAN转印迹膜转印膜10401396 10401196WHATMAN*纤维素膜(NC膜)转印迹膜转印膜10401396 10401196其它的*纤维素杂交膜可能含有大量的醋酸纤维素，这会降低蛋白的结合能力。Protran杂交膜采用纯*纤维素制成，具有好的操作强度，兼容多种检测方法，包括同位素法，化学发光法(以luminol为基础)，比色法和荧光法等。
与PVDF膜相比，Protran*纤维素膜在使用中不需要甲醇预湿步骤，这使它可以用于那些需要亲水性环境的蛋白质的转移，在转移之前，膜仅需要在水中简单润湿，然后置于转移缓冲液中，而不再需要其它预湿步骤。
高结合力，低背景
除了具有高结合能力以外，Protran*纤维素膜本身产生的背景非常低，膜*的表面性质保证了优异的信噪比，而同时却不需要严格的清洗条件。
小分子蛋白的高保留率
Protran*纤维素膜有多种孔径大小可供选择，使不同的应用都可以获得佳的效果。0.2μm孔径的Protran BA83*纤维素膜通过减少小分子“下漏”来保留分子量小于20KD的蛋白质分子。0.45μm孔径的Protran BA85*纤维素膜是较大分子量样品和常规核酸研究的理想选择。0.1μm孔径的Protran BA79则用于分子量低于7kD的小分子蛋白转移。
Protran*纤维素膜的一个主要优势在于，经实验证明，结合在Protran膜上的蛋白能够保持分子识别活性长达5年。
Protran杂交三明治组合
由1张预切的*纤维素膜和2张3MM层析杂交纸组成的三明治包装，帮您节省更多的时间。这些膜都是用于杂交的质量好的NC膜——Protran BA83或者BA85。
Protran *纤维素膜的结合能力为80~150µg/cm2，可高压灭菌(液体冷循环)
GE RPN303C
PALL 66485 常用的NC膜 30cm*3m/卷超低*：1250.00/卷现货
2. PVDF膜
与*纤维素膜相比，PVDF膜在蛋白质截留能力，机械强度和化学相容性上都更*的性能。市售*纤维素膜的典型结合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜结合量是100-200μg/cm2(而结合强度PVDF比硝纤膜强6倍！)。但是PVDF膜大的优点不仅于此：更好的机械强度和化学耐受性使PVDF膜在各种染色应用和多重免疫检测中成为理想选择；而且单个凝胶的泳道复本可用于多种目的，特别是需要做N端蛋白测序，在相当“严酷”的清洗条件下，当尼龙或者硝纤膜已经降解的情况下PVDF膜依然保持本色，笑傲江湖。所以PVDF也是要做蛋白测序的*选择。但不适合荧光。PVDF膜特别注意的是需要100%甲醇预处理(不超过15秒)再用缓冲液平衡，才能用，而且适用过程中万一干了也要同样程序再处理(不过要真出现这种问题也是自己欠扁，谁要你不小心呢，转膜前处理也就罢了，转膜后再这样处理可能会影响后继的抗体识别呢)。PVDF膜同样分0.45um和0.2um的，后者孔径小，对小分子蛋白有较好的拦截吸附，背景可能会比前者稍高。
pvdf膜生产商：
pvdf膜生产商：
MILLIPORE * 常年 现货
IPVH00010 0.45um 1650.00/卷
ISEQ00010 0.22um 2050.00/卷
PALL 66543 2150.00/卷
卷膜经济实惠，裁剪剩下的边角料还可以用来做点杂交。再次强调的是，疏水PVDF膜在用前必须经过50%或以上体积比的甲醇或者乙醇溶液处理几分钟，待膜变成半透明后用纯水漂洗一下，转入电泳缓冲液平衡才能用
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