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细菌蛋白提取试剂盒用于大肠杆菌提取可溶性蛋白,试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂,作用较为强烈,可快速获得总蛋白,可用于免疫印迹实验等基础研究实验,由于含有上述的酶抑制剂,不能用于研究蛋白激酶的研究。细菌蛋白提取试剂盒仅用于科研。
操作方法:
1、细菌可溶性蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的蛋白酶抑制剂和PMSF;混匀,放置在冰上备用;
将菌体湿重称重,然后按照比例(1g:10ml)加入的新配置的裂解液,混匀,过程注意冰上操作;
将混匀液移入超声仪中,超声;
超声条件:总时间45min,超声时间3s,间隔时间3s,过程为冰浴环境;
超声结束,w4度离心,10000r/min20min;
吸取上清至新的管中;
进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80 oC,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)
注意事项:
实验过程,所有试剂都要需要预冷或者即融,保证操作过程中的低温环境;
PSMF(有毒)现用现加,因为PMSF在水溶液中会快速降解;
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